中国Prader-Willi综合征患者的分子基础研究——附2例产前诊断报告

摘要

基因组印记(Genomic imprinting)：又称为遗传印记，指同一条染色体或同一种基因的改变，由不同性别的亲本传递给子代时可引起不同表型的现象。它不符合经典的孟德尔理论，最可能发生的机制是基因组甲基化。Prader-Willi综合征(PWS)是一种与基因组印记相关的遗传性疾病，主要表现为肥胖、精神发育迟缓和生长发育障碍，新生儿发病率约为1/22,000～1/10,000。
　　 PWS的分子缺陷类型主要有：父源性15q11-q13缺失、母源性15号染色体单亲二体(UPD)、相关印记中心缺陷和其它罕见类型。常用于诊断PWS的方法有甲基化PCR(MS-PCR)、FISH、Southernblotting和连锁分析等。
　　 在前期的研究基础上，我们通过选择PWS典型缺失区域内、外STR遗传标记，初步建立了一种适用于中国人群的PWS核心家庭成员STR连锁分析方法，该方法可以准确判断缺失型和单亲二体型。在本研究中，我们运用STR家系连锁分析方法，对4例疑似PWS患者进行了基因诊断研究，确定了3例PWS患者，并明确其中2例的分子缺陷类型为父源缺失，1例为单亲二体，另外1例病例通过此方法可排除上述两种导致PWS的突变类型。同时，我们又分别为2例已经确诊为缺失型和单亲二体型的PWS先证者所在家庭提供了遗传咨询及产前诊断，微卫星连锁分析结果显示两个家庭的胎儿分别不存在15号染色体的父源缺失和母源单亲二体。
　　 此外，本研究主要涉及一例PWS伴眼皮肤白化病(Oculocutaneousalbinism，OCA)患者的分子基础研究和基因诊断，导致此患者PWS的原因是父源15q11-13缺失，值得注意的是此患者的缺失范围较小，与世界通常认为的缺失断裂点相比，缺失范围缩短很多，随访发现随着该例患儿年龄增长表现出的临床症状较典型患者轻。我们最后确定该患者为一名PWS伴OCA2患者，导致OCA2的P基因内存在一个国际已报道的V443I错义突变，同源染色体的P基因整个缺失，同源染色体缺失长度约为3.8Mb(包含P基因)。PCR定性分析和遗传标志连锁分析确定15q11-13的缺失断裂点所在上游和下游范围分别约为200bp和60kb。
　　 PWS作为一种遗传综合征，目前仍缺乏特效的治疗方法，不同分子缺陷类型的PWS病例，其遗传咨询存在较大差异，故准确判断分子缺陷类型具有重要的意义；研究我国PWS患者的分子缺陷类型，建立PWS的分型诊断方法，对于有效开展遗传咨询、再发风险估计和产前基因诊断具有重要意义。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：中英文名词对照

声明

1 前言

1.1 Prader-Willi综合征的临床表现

1.2 Prader-Willi综合征的遗传特征

1.3 Prader-Willi综合征的分子基础

1.4 Prader-Willi综合征分子诊断与研究的技术策略

1.5 PWS病例的遗传咨询和产前诊断

1.6国内Prader-Willi/Angelman综合征研究现状

1.7本研究的内容和意义

2实验材料

2.1研究对象

2.2主要试剂

2.3主要仪器设备

2.4试剂配制

3实验方法

3.1外周血基因组DNA和羊水/绒毛DNA抽提

3.2引物设计

3.3 PCR扩增

3.4单倍型构建

3.5 DNA测序分析

4实验结果

4.1 STR家系连锁分析结果

4.2单倍型构建结果

4.3一例OCA合并PWS基因诊断结果

5讨论

5.1一例PWS合并眼皮肤白化病患者的分子基础研究

5.2 PWS疑似病例分子缺陷类型及2例PWS产前基因诊断

5.3 PWS基因诊断方法研究

6结论

参考文献

攻读硕士学位期间发表的论文

附录

致谢