华南地区小种群禽类中H9N2亚型流感病毒特性研究

摘要

流行性感冒(简称,流感)是由不断变异的流感病毒(RNA病毒)引起的一种传染性疾病。其快速的抗原性变异能够逃避人群中的免疫监控而造成流行,这要求我们必须对其流行进行连续的监测,以达到不断更新疫苗预防流感的目的。研究表明,哺乳类动物,包括人类,的流感病毒都直接或间接来源于禽类流感病毒。目前H9N2亚型流感病毒分布广泛,多次发生传染人的事件,加上华南地区作为理论中“流感中心”的特殊地位,因此对该地区进行严密的流感病毒监测具有重要的意义,特别是对近年来该地区不断涌现的新种群中流感病毒进行检测。本研究以鹧鸪/欧石鸟(Pa/Cu)中H9N2亚型流感病毒为对象,对其进行全面的分子流行病学分析。结果表明,H9N2亚型流感病毒在这些新种群中广泛流行,并且检测到多个基因型的存在,进化树分析证实有多个基因型与同期在水禽类中分离到的基因型相近:这表明H9N2亚型流感病毒很可能通过发生跨种属传递从水禽感染这些小种群陆基禽类。作为大流感预防的一部分,对这些新形成小种群中的H9N2亚型流感病毒进行进一步的监测和研究显得尤为迫切。
　　背景和目的:
　　近年来,在素有“世界流感流行中心”之称的华南地区禽流感频繁暴发,这给人们带来了严重的财产和健康损失。尤其是H9N2亚型流感病毒,其活动十分猖獗。流行病学和遗传学研究表明,该亚型的流感病毒具有广泛的地理和宿主分布,而且在人群中有较高的隐性感染率。最近在香港和广东地区的人群中又相继分离到H9N2亚型流感病毒,表明H9N2亚型流感病毒很可能成为诱发下次人类大流感的病毒株。因此我们必须对该亚型的流感病毒进行严密的监测,为可能的大流感暴发做准备。华南地区近年来的工业化进程加快,野鸟家养化导致许多新种群的形成和流感病毒生态系统的改变。在这些新形成的流感病毒易感种群中, H9N2亚型的流行情况至今未有研究。本课题意在:
　　1、以Pa和Cu为代表,探讨H9N2亚型流感病毒在这些新形成的小种群中的流行情况;
　　2、探讨这些小种群中流感病毒的来源:是从其它动物跨种属传递而来,还是本身为流感病毒的天然宿主;
　　3、探讨这些新形成种群中H9N2亚型流感病毒的进化情况,以及其在整个流感病毒生态体系中的作用;
　　材料和方法:
　　每周采集标本一次,常规处理后,接种于9-11日龄鸡胚尿囊腔,35℃恒温培养72小时,收取鸡胚尿囊液。血凝阳性(AD≥16)且细菌培养阴性标本进一步做HI和NI实验以鉴定亚型,标本保存于-80℃箱。从中选取18株H9N2病毒代表株进行下一步的分子生物学工作。用Qiagen的RNeasy RNA试剂盒提取病毒RNA后,逆转录合成cDNA。以之为模板,用针对不同基因片段设计的特异性引物,进行PCR反应扩增。以PCR纯化试剂盒纯化PCR产物,然后进行测序反应。测序在在DNA测序仪(377)上进行。用GCG10.2编辑和处理基因序列。用PAUP4.1进行进化树分析。在GeneDoc2.3上进行序列比较和同源性分析。
　　结果:
　　1、以Pa、Cu为代表的小种群禽类中,H9N2亚型常年流行;
　　2、抗原学分析结果表明,这些病毒株都属于Y280系列,与G9和SW9抗原性相似,而与anti-G1和anti-1073反应性低;
　　3、进化树分析表明,这些基因型与同期同地在水禽中分离到的基因型具有很高的同源性;
　　4、基因型分析表明,有多个H9N2基因型存在,在这些新种群中经历复杂的筛选,某些基因型已趋于稳定;
　　讨论:
　　1、以PA、CU为代表的小种群禽类是流感病毒的天然宿主—基因储存库,还是流感病毒的中间宿主;
　　2、仅有Y280系列H9N2亚型被检测到,未发现G1系列,这是否意味着这些新种群对Y280具有更高的易感性;
　　3、多个基因型存在,这些重配病毒株产生的中间宿主—水禽还是这些小种群陆地禽类;
　　4、这些基因型在同期也从水禽中分离到,它们是由水禽经跨种属传递传播给陆地禽类,还是反向传播的结果;
　　5、众多的基因型在小种群禽类中经过快速的筛选,大多很快地消失,但也有少数基因型已经趋于稳定,这些基因型的进化情况;
　　6、这些小种群禽类群体的形成对流感生态体系的影响。

目录

目录

中文摘要

英文摘要

前言

材料和方法

一 材料

1．实验仪器设备

2．实验试剂

3．其它材料

二、方法

1.病毒的分离

2.分子生物学

3. 基因分析

结果

一、 流行病学

二、 抗原性分析

三、 进化树和基因型分析

讨论

参考文献

致谢

§文献综述§

参考文献