潮汕贲门癌中p-ERK蛋白表达与幽门螺杆菌感染的相关性研究

摘要

背景和目的：
　　贲门癌(Gastric Cardia Carcinoma)是潮汕地区高发恶性肿瘤之一,贲门癌的发病率约为34.81/10万,仅次于食管癌。贲门癌中常伴发幽门螺杆菌(H.pylori)感染,H.pylori可以CD74作为受体定植于上皮细胞并分泌CagA蛋白注入细胞,活化多种信号途径激活ERK1/2以最终调节细胞增殖、分化、凋亡。细胞外信号调节激酶(ERK)通路是有丝分裂活化蛋白激酶(MAPK)信号传导途径系统中最主要和经典的通路,ERK的活化被认为与细胞的分化、癌变和恶性进展程度等密切相关。但H.pylori在贲门癌中的分布及其作用仍未知。本实验组前期采用改良Giemsa染色、H.pylori特异性免疫组织化学标记染色检测幽门螺杆菌在潮汕人贲门癌中的分布情况。本实验在此基础上联合p-ERK蛋白免疫组织化学标记染色观察分析贲门癌、癌旁粘膜和正常粘膜中p-ERK蛋白的表达情况,检测了H.pylori定植与CD74蛋白表达的关系,并采用SIMPLE同部位标记和消除抗体法观测贲门癌中H.pylori、p-ERK、CD74的共表达情况,分析幽门螺杆菌定植和p-ERK蛋白表达、p-ERK与CD74蛋白表达之间的关系,初步探讨幽门螺杆菌感染后细胞内信号通路的传递,为进一步研究H.pylori在贲门癌发生发展过程中所起的作用提供一定的根据。
　　材料和方法：
　　1.研究对象:收集2007年至2010年汕头大学医学院肿瘤医院送检病理学教研室贲门癌手术标本及配对的癌旁、远离癌旁的切缘组织各116例,共348例。根据病理学类别分型:管状腺癌100例,粘液腺癌8例,腺鳞癌5例,乳头状腺癌1例,小细胞未分化癌2例。管状腺癌根据细胞分化程度分级:低分化腺癌46例,中分化腺癌50例,高分化腺癌4例。
　　2.HE染色:常规HE染色观察贲门癌标本组织学类型和癌旁粘膜、正常粘膜组织学形态。
　　3.免疫组织化学染色:前期实验采用Envision Labelled Peroxidase System(ELPS法)二步法,用幽门螺杆菌特异性抗体标记幽门螺杆菌,观察其在贲门癌组织中的感染分布(详见2007级硕士毕超学位论文),用p-ERK和CD74单克隆抗体观察贲门癌细胞中的蛋白表达情况。
　　4.SIMPLE同部位标记和消除抗体法:观察H.pylori、p-ERK、CD74三者的位置关系。
　　5.细菌的Giemsa染色:观察幽门螺杆菌在贲门癌组织中的分布情况。
　　6.图像分析法:应用Leica IM50图像采集系统,每张切片在400倍镜下随机选取5个视野采集图片后用Image-Pro Plus 6.0图像分析系统对p-ERK、CD74染色结果进行分析,p-ERK计算每张切片的阳性标记指数(labelling index,LI),CD74计算平均光密度。
　　7.统计分析:应用SPSS15.0对统计结果进行分析,计量资料组间比较采用单因素方差分析,Spearman相关分析。
　　结果：
　　1.p-ERK蛋白在各分组中的表达:p-ERK蛋白在正常贲门粘膜中极低表达,在癌旁粘膜和贲门癌组织中表达增加。组间比较发现,正常粘膜分别与癌旁粘膜、贲门癌组织比较差别有高度统计学意义(F=144.966,p<0.01)。癌旁粘膜与贲门癌比较差别有高度统计学意义(p<0.01)。贲门癌随着分化程度的降低,p-ERK的表达率增加(P<0.05)。
　　2.p-ERK蛋白表达与幽门螺杆菌感染的关系:p-ERK蛋白表达在H.pylori的定植阳性标本与阴性感染标本比较差别有高度统计学意义(F=17.159,p<0.01);各组间比较发现,H.pylori定植阴性者与定植密度I级、II级、III级分别比较差别有高度统计学意义(p<0.01),I级与II级、III级分别比较差别有高度统计学意义(p<0.01),II级和III级之间差别没有统计学意义(p>0.05)。
　　3.幽门螺杆菌感染与CD74蛋白表达的关系:CD74蛋白表达在H.pylori定植阳性标本与阴性感染标本比较差别有高度统计学意义(F=14.571,p<0.01),组间比较:除H.pylori定植密度II级与III级比较差别无统计学意义外,其余各组比较均有高度统计学意义(p<0.01)。
　　4.幽门螺杆菌感染、p-ERK蛋白表达与CD74蛋白表达情况的关系:运用Spearman相关分析显示H.pylori感染与p-ERK蛋白阳性标记指数的相关系数rs为0.581(p<0.01);H.pylori感染与CD74蛋白的平均光密度的相关系数rs为0.539(p<0.01);CD74蛋白的平均光密度与p-ERK蛋白阳性标记指数的相关系数rs为0.334(p<0.01),结果有高度统计学意义。SIMPLE同部位标记和消除抗体法进一步验证了三者在肿瘤局部区域存在共表达。
　　结论：
　　1.p-ERK蛋白在贲门癌组织中表达明显高于其对应的正常粘膜和癌旁粘膜组织,提示p-ERK蛋白在贲门癌发生发展过程中起一定作用;且低分化贲门癌中p-ERK表达最高,提示p-ERK蛋白表达差异还与肿瘤细胞分化程度相关。
　　2.p-ERK蛋白表达与H.pylori定植密度成正相关,提示H.pylori定植可能影响与激活p-ERK蛋白表达。
　　3.p-ERK、CD74蛋白表达水平和H.pylori定植密度三者互成正相关,提示H.pylori可通过其受体CD74高表达参与ERK通路的激活。
　　4.采用SIMPLE同部位标记和消除抗体法验证发现贲门癌中H.pylori与p-ERK蛋白、CD74与p-ERK蛋白之间存在局部共表达,进一步提示H.pylori感染后可能通过H.pylori-CD74-ERK通路的激活,对贲门癌的发展发挥一定的作用。

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缩 略 词

目录

前 言

材料与方法

1 标本

2 主要仪器设备

3 主要试剂

4主要溶液配制

5 研究方法

6 统计分析

结 果

1. p-ERK蛋白在贲门癌及配对正常粘膜、癌旁非癌粘膜中的表达

2. p-ERK蛋白的表达与H.pylori定植密度的关系

3. CD74蛋白的表达与H.pylori定植密度的关系

4. p-ERK、CD74蛋白的表达与H.pylori定植密度的关系

讨 论

1.p-ERK蛋白在贲门癌中的表达

2.p-ERK蛋白表达与H.pylori感染程度的关系

3.贲门癌中p-ERK蛋白表达与CD74蛋白表达、H.pylori感染程度的关系

结 论

附 图

参考文献

综 述

参考文献

致谢

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