逆转录病毒pol序列在慢性粒细胞白血病患者血清中的检测与进化分析

摘要

一.研究背景
　　白血病是人类常见的恶性肿瘤,然而,目前除了成人T细胞性白血病/淋巴瘤(Adult T-cell Leukemia/Lymphoma,ATLL)与人T细胞白血病病毒(Human T-cell Leukemia Virus Type-1,HTLV-1)之间的病因学关系得以确定外,包括慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)在内的其他类型白血病的病因均未明确。过去的研究提示,逆转录病毒在慢性粒细胞白血病的发生和发展中可能扮演着重要角色。
　　二.目的和方法
　　为探讨逆转录病毒与慢性粒细胞白血病之间的关系,本研究以慢性粒细胞白血病患者(n=39)为研究对象,以健康人(n=46)和急性白血病患者(n=15)为对照,分别提取 CML组及对照组血清RNA,DNase处理后采用半巢式RT-PCR检测逆转录病毒保守的pol基因区段,阳性扩增产物再进行TA克隆及测序。根据RT-PCR阳性率,对逆转录病毒pol基因在慢性粒细胞白血病患者组及对照组中的表达情况进行统计分析;通过比较本研究获得的逆转病毒与其他已知逆转录病毒相应pol片段之间的核苷酸及氨基酸序列差异性,对其进化关系进行分析。
　　三.结果
　　逆转录病毒pol基因片段的RT-PCR统计分析显示:1)与健康人对照组相比,逆转录病毒pol基因的表达阳性率在慢性粒细胞白血病患者中显著升高(P<0.05);2)与急性白血病患者对照组相比,CML患者中逆转录病毒pol基因的表达阳性率升高有显著的统计学意义(P<0.05)。
　　在本研究中,我们从慢性粒细胞白血病患者的血清中扩增出一段126bp长的核苷酸序列,暂命名为ST-CMLRV。序列分析显示,ST-CMLRV序列与Multiple sclerosis associated retrovirus polyprotein(pol) mRNA,即多发性硬化相关的逆转录病毒pol基因区序列最为接近,相对应的pol片段核苷酸序列相似性为92％,氨基酸序列相似性为85%;进化分析显示,该逆转录病毒属于 HERV-W(Human Endogenous Retrovirus-W)家族,与人免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV)及HTLV无明显的进化相关关系。
　　四.结论
　　本研究结果初步表明,慢性粒细胞白血病可能与内源性逆转录病毒的表达有关。但逆转录病毒与慢性粒细胞白血病之间的病因学关系,以及逆转录病毒,特别是内源性逆转录病毒在慢性粒细胞白血病的疾病进展中的作用还有待进一步证实。

目录

封面

中文摘要

英文摘要

英文缩写词

目录

第1章 前言

1.1逆转录病毒

1.2 慢性粒细胞白血病

1.3 逆转录病毒感染和白血病

第2章 材料和方法

2.1主要试剂及器材

2.2 实验方法

第3章 结果

3.1 RT-PCR结果

3.2 TA克隆后的PCR结果

3.3测序结果

3.4 序列分析

3.5 PCR阳性结果的统计学分析

第4章讨论

一、核酸提取物质的选择

二、使用简并性引物

三、逆转录病毒基因表达和慢性粒细胞白血病的相关性

第5章 结论

参考文献

附录

致谢

本人简历