NKG2D在口腔鳞癌患者CD3(+)CD56(+)NKT细胞中的作用

摘要

目的:探讨口腔鳞癌患者CD3(+)CD56(+)NKT细胞NKG2D受体抗肿瘤免疫的调节作用。
　　方法:分别从30例口腔鳞癌患者和30例正常人外周血中提取CD3(+)CD56(+)NKT细胞,并通过流式细胞技术检测CD3(+)CD56(+)NKT细胞数量差别,利用PCR、Real-time PCR和Western Blot技术从分子水平和蛋白水平分析NKG2D在两组中CD3(+)CD56(+)NKT细胞的表达差异。采用siRNA-NKG2D转染方法,分析NKG2D受体对CD3(+)CD56(+)NKT细胞的细胞毒性,分泌IL-2和IFN-μ的影响。采用Spss13.0软件包对数据进行t检验和方差分析。
　　结果:口腔鳞癌患者和正常人外周血中CD3(+)CD56(+)NKT细胞数量所占比值分别为(10.04±1.39)％和(3.35±1.11)%并无明显统计学差异(p=0.107),但Real-time PCR的结果显示:口腔鳞癌患者外周血CD3(+)CD56(+)NKT细胞表面NKG2D受体的表达量为0.0374±0.0117,显著低于正常人0.1138±0.0840(p=0.0002),转染过siRNA-NKG2D的CD3(+)CD56(+)NKT细胞对肿瘤细胞的杀伤作用显著降低,其分泌IL-2和IFN-μ也受到明显抑制(p=0.04)。48h,60h,72h,三个时间点转染siRNA-NKG2D组,阴性对照组和未转染组分泌IL-2和IFN-μ比较,3个时间点siRNA-NKG2D组的分泌量分别是:(2.61±0.75)ng/ml;(2.93±0.86)ng/ml;(3.32±0.91)ng/ml和(0.95±0.23)ng/ml;(1.12±0.32)ng/ml;(1.21±0.37)ng/ml.
　　结论:相对于正常人,口腔鳞癌患者中CD3(+)CD56(+)NKT细胞因NKG2D表达下降,其肿瘤免疫调控作用受到影响。这些发现为NKG2D应用于口腔鳞癌的免疫治疗奠定基础。

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目录

前言

材料与方法

1. 实验材料

2. 实验方法

3. 统计学数据处理：

结果

1. 2组CD3(+)CD56(+)NKT细胞数量比较

2. CD3(+)CD56(+)NKT中NKG2D的分子表达

3. CD3(+)CD56(+)NKT细胞中 NKG2D的蛋白表达

4. 转染siRNA后各组 CD3(+)CD56(+) NKT细胞表达NKG2D水平

5. 细胞毒性分析

6. IFN-μ和 IL-2检测结果

讨论

结论

展望

参考文献

附录

已发表论文：

致谢

综述及参考文献

1 NKT细胞的分类

2 NKT细胞在口腔肿瘤免疫中的作用

3 Ⅰ型NKT细胞

4 Ⅱ型NKT细胞

5 Ⅰ和Ⅱ型NKT细胞在口腔肿瘤免疫中的相互作用

6 参考文献