SSAO介导的氧化脱氨反应对3T3-L1脂肪细胞的氧化应激作用

摘要

背景：
　　随着社会经济的发展，人民生活水平逐渐提高，生活方式和饮食结构上的变化，加之运动的减少使得越来越多人有肥胖症，在全球范围内肥胖人口的比例日益增加。大量的研究发现肥胖与胰岛素抵抗、糖尿病及心血管疾病的发生、发展有密切的关系，是许多代谢性疾病的共同危险因素。
　　脂肪组织是一个重要的内分泌器官，其能分泌多种细胞因子。研究发现肥胖患者体内常处于氧化应激状态，脂肪组织中过多产生的活性氧分子可引起多种细胞因子表达异常，从而影响机体代谢，参与或引发肥胖相关的代谢或心血管疾病，及并发症的发生和发展。因此，探讨脂肪细胞氧化应激的产生因素具有科学意义。
　　氨基脲敏感型胺氧化酶（SSAO）是一类催化胺类化合物氧化脱氨的酶。可催化其反应底物如伯胺类化合物，产生相应的醛、过氧化氢及氨。有报道体内存在的甲胺，经SSAO催化生成的甲醛和过氧化氢可通过协同增强氧化应激，造成血管内皮细胞损伤。SSAO在成熟脂肪细胞中大量存在，且与细胞的分化程度有关。目前研究认为，SSAO在脂肪细胞中可参与葡萄糖的转运，具有类胰岛素的作用。但其在脂肪细胞中的确切的病理生理功能仍不甚清楚。由于成熟脂肪细胞高表达SSAO，而体内同时存在内源性底物（甲胺，氨基丙酮等），因此，我们猜测SSAO可能参与了脂肪细胞的氧化应激。本文以3T3-L1脂肪细胞为模型，以甲胺、苯甲胺为底物探讨SSAO在脂肪细胞中的病理生理意义。
　　目的：
　　观察氨基脲敏感型胺氧化酶催化其底物甲胺（MA）、苯甲胺（BZA）的氧化脱氨反应对成熟3T3-L1脂肪细胞的氧化应激作用。
　　方法：
　　3T3-L1前脂肪细胞诱导分化为成熟脂肪细胞；高效液相色谱法检测不同分化天数下细胞SSAO活性的变化；MTT法检测不同浓度的MA或BZA对细胞活力的影响；荧光探针的方法检测细胞在底物作用下产生的活性氧；以0.5 mmol/L MA或BZA处理成熟脂肪细胞或未经诱导分化的前脂肪细胞4 h，观察细胞产生的甲醛（FA）、苯甲醛（BZ）、脂质过氧化指标丙二醛（MDA）、总超氧化物岐化酶（T-SOD）和谷胱甘肽（GSH）的变化。
　　结果：
　　SSAO活性随细胞分化天数的增加而增加，并于第8 d达到高峰；0.1~1 mmol/LMA或BZA作用细胞4 h对细胞活力无显著影响（P>0.05）；在成熟脂肪细胞中，0.5 mmol/L MA或BZA孵育后，细胞产生的活性氧增高，约为阴性对照组的3到4倍，差异有统计学意义（P<0.05）；MDA的含量增加，而T-SOD活性、GSH浓度降低，与阴性对照组相比，差别有统计学意义（P<0.05）；在未经诱导分化的前脂肪细胞中，MA、BZA的作用下，活性氧、MDA、T-SOD和GSH的变化不明显（P>0.05）。
　　结论：
　　SSAO可能通过其介导的氧化脱氨反应引起3T3-L1脂肪细胞产生氧化应激。

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第一章 前 言

第二章 材料与方法

2.1实验材料

2.2 实验方法

2.3 统计学分析

第三章 实验结果

3.1 3T3-L1细胞诱导分化及鉴定

3.2 3T3-L1 细胞诱导分化过程中SSAO活性的变化

3.3 SSAO底物MA、BZA对成熟脂肪细胞活力的影响

3.4 MA、BZA对3T3-L1细胞ROS产生的影响

3.5 SSAO介导MA、BZA产生FA、BZ

3.6 SSAO底物对成熟脂肪细胞和未诱导分化的前脂肪细胞MDA、T-SOD、GSH的影响

第四章 讨论

第五章 结论

参考文献

综述: 氧化应激与代谢相关疾病研究进展

附录一: 甘露醇对人肾小管上皮细胞(HK-2)的氧化应激作用

附录二：试剂配制

附录三：研究生期间的论文

致谢