肾移植受者IMPDH和HGPRT活性及基因多态性与硫唑嘌呤所致不良反应的相关性研究

摘要

背景:
　　 抗代谢药硫唑嘌呤(azathioprine，AZA)在临床上常用于器官移植、急性白血病、自身免疫疾病和慢性炎症性肠病的治疗。由于该药治疗窗狭窄，易出现肝脏损害、血液毒性及胃肠紊乱等不良反应，从而导致治疗中断或失败。研究发现，硫嘌呤甲基转移酶(TPMT)，三磷酸肌苷焦磷酸酶(ITPA)的活性和基因多态性与AZA所致不良反应相关，但仅能解释部分AZA所致的不良反应。次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)及次黄嘌呤磷酸脱氢酶(IMPDH)是AZA代谢过程中的重要代谢酶，该两种酶是否和AZA所致的不良反应相关尚不清楚。
　　 目的:
　　 本项目拟研究AZA代谢酶HGPRT及IMPDH活性和多态性与AZA所致不良反应的关系，以便为临床合理使用AZA提供理论和实验依据。
　　 方法:
　　 本研究选择了86例正在服用或曾经服用过AZA的肾移植受者以及304例健康志愿者作为研究对象，回顾性研究此86例肾移植受者发生不良反应情况，分析不良反应发生的高危因素。建立高效液相色谱法(HPLC)测定人红细胞中HGPRT活性，采用直接测序法检测了HGPRT IVS6-12C＞A、IMPDHⅠ型中rs2278293、IMPDHⅡ型中rs11706052的基因型，采用限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)的方法，测定了IMPDHⅠ型中rs2278294的基因型，结合肾移植受者发生不良反应的情况，系统地分析了IMPDH和HGPRT活性和基因多态性与AZA所致不良反应的关系。
　　 结果:
　　 86例入选患者中，共有36例患者出现AZA所致的不良反应，其中有14例为血液毒性、11例为肝脏毒性、9例为胃肠道反应、3例为流行性感冒样症状，给予减剂量或停药或对症处理后均能自行恢复。不良反应发生率高达41.86％。男性患者服用AZA后所致肝脏损害的风险是女性患者的9.670倍(p＜0.05)。其他非遗传性机体因素和合并用药不会增加AZA所致不良反应的风险。
　　 本研究中，86例肾移植受者HGPRT活性范围为44.59-262.16 U，平均为100.17±33.50U，健康受试者HGPRT活性范围为28.43-153.65 U，平均为99.30±17.21U，均呈正态分布。两组HGPRT活性均值差异无统计学意义(P＞0.05)。健康受试者和肾移植受者的HGPRT高活性、低活性和正常活性分布的差异有统计学意义(P＜0.01)，肾移植受者组的HGPRT低活性频率明显高于健康受试者组(P＜0.05)，正常活性频率则明显低于健康对照组(P＜0.05)。
　　 入选肾移植患者中发现2例HGPRT IVS6-12C＞A突变体，突变频率为2.3％。而健康受试者中未发现突变，分析发现HGPRT活性与基因型之间无明显相关性(P＞0.05)。流行性感冒样症状组患者的平均HGPRT活性明显高于肾移植对照组（147.47±101.24U vs100.46±29.31U，p＜0.05），而血液毒性组、肝脏毒性组、胃肠道反应组与肾移植对照组比较，活性差异无统计学意义。AZA所致不良反应与HGPRT基因多态性之间没有明显相关性(P＞0.05)。
　　 肾移植受者组IMPDH rs2278293、rs2278294、rs11706052突变频率分别为9.20％，68.97％和6.90％，健康受试者组则分别为14.14％、77.96％和9.87％。两组间各位点的突变频率差异均无统计学意义(p＞0.05)。但两组间rs2278294基因型分布差异具有统计学意义(p＜0.001)，肾移植受者组的GA基因型频率明显高于健康受试者组(p＜0.01)，AA基因型频率则明显低于健康受试者组(p＜0.001)。rs2278294与AZA所致血液毒性呈明显相关性(P＜0.05)，rs2278294突变型杂合子会导致AZA所致血液毒性的发生，而rs2278293、rs11706052突变型与AZA所致不良反应没有相关性(P＞0.05)。
　　 因此，在服用AZA之前，测定患者HGPRT活性，筛选出HGPRT高活性者有利于避免AZA所致流行性感冒样症状不良反应的发生，此外，测定IMPDH rs2278294基因型，筛选出rs2278294突变型杂合子有利于避免AZA所致的血液毒性。另外对于男性患者，服用AZA过程中，更应该密切关注肝功能的变化，以避免肝脏不良反应的发生。

目录

摘要

中英文缩略词表

前言

第一部分 肾移植术后硫唑嘌呤所致不良反应的危险因素研究

1．1 对象与材料

1．2 试验方法

1．3 结果分析

1．4 小结与讨论

第二部分 HGPRT活性及基因多态性的测定

2．1 对象与材料

2．2 试验方法

2．3 实验结果

2．4 小结与讨论

第三部分 HGPRT活性及基因型与硫唑嘌呤所致不良反应的相关性研究

3．1 研究对象

3．2 试验方法

3．3 结果分析

3．4 小结与讨论

第四部分 IMPDH基因多态性的测定及其与硫唑嘌呤所致不良反应的相关性研究

4．1 对象与材料

4．2 试验方法

4．3 结果分析

4．4 小结与讨论

全文总结

参考文献

综述 嘌呤类药物代谢酶HGPRT和IMPDH的研究进展

论文发表情况

致谢

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