2013-2014年广州地区腹泻患者人双埃可病毒分子流行病学分析

摘要

腹泻病是一种儿童常见病，在腹泻病毒中，引起腹泻最常见的病毒是轮状病毒与人杯状病毒，其中A群轮状病毒可引起重症腹泻，是目前预防工作的重点;人杯状病毒可引起暴发与流行，常导致公共卫生事件，其感染率仅次于A群轮状病毒;腺病毒也可引起腹泻，逐渐在国内外受到重视;星状病毒检出率较低，但问题也日益突出;有研究发现人类博卡病毒是继轮状病毒和杯状病毒之后导致腹泻的重要病毒。
　　人双埃可病毒(Human parechovirus， HPeV)属于小RNA病毒科(Picomaviridae)，双埃可病毒属(Parehovirus)的一种无囊膜、无纤突的单股正链RNA病毒，基因组包含7300个核苷酸，在5'端到3'端都有一个非翻译区(UTR)，有3个结构蛋白(VP1-VP3)和7个非结构蛋白(2A-2C和3A-3D)。了解广州地区腹泻患者中病毒流行特点及流行毒株，为预防腹泻提供重要数据支持。
　　目的：
　　1.比较健康人群、腹泻患者中HPeV的感染率，丰富HPeV在腹泻、健康人群中流行病学资料，探讨HPeV与腹泻的关系。
　　2.了解在腹泻患者和健康人群中检出的HPeV的进化关系。
　　3.了解广州地区2013-2014年腹泻患者常见病毒HRV、NoV、SaV、AdV和AstV流行病学特点，丰富病毒性腹泻相关资料与数据，为我国病毒性腹泻提供分子生物学和流行病学新资料。
　　方法：
　　1.标本收集，
　　2.病毒检测。
　　结果：
　　1.研究对象基本情况
　　①腹泻患者基本情况:本研究按腹泻诊断标准（按WHO腹泻标准:粪便水分及大便次数异常增加，通常指24 h内3次以上）共收集腹泻患者粪便标本436份，其中男性226例，女性210例，性别比为1.07∶1;最大年龄89岁，最小年龄的为0.1岁，年龄平均为22.7±3.4岁，其中在2岁以下儿童所占比例最高，约占45.39％。患者性别在年龄分布差异无统计学意义(t=1.744，P=0.082)。
　　②健康组情况:按纳入标准的粪便标准206份，其中男107例，女99例，男女性别比为1.1∶1，年龄最大65岁，最小3岁，平均年龄26.4±4.2岁，性别在年龄分布差异无统计意义(t=1.249，P=0.213)。
　　2.腹泻患者中常见病毒病原
　　①436份腹泻患者粪便标本中，7种病毒检出率从高到低分别是HRV(11.69％，51/436)、HPeV(11.69％,51/436)、AdV(9.86％,43/436)、HBoV(6.88％,30/436)、SaV(1.15％,5/436)、AstV(0.46％,2/436)。
　　②常见病毒的人群分析:三个年龄组:0-2岁、2-7岁、7岁以上;0-2岁年龄组中，主要感染的病毒有HRV(13.7％)、HBoV(6.7％);2-7岁年龄组主要感染病毒有HPeV(13.3％)、SaV(6.7％)、AstV(4.4％)、AdV(13.3％);7岁以上年龄组主要感染的病毒有NOV(8.4％)。时间分布:9-12月份是多种病毒流行的月份，在5月份达到低谷。HRV、HPeV、AdV、HBoV在8-12月份呈上升趋势。HRV几乎全年均有检出，但在9-11月份检出率最高;HPeV主要在8-10月份流行，10月份检出率最高;NOV病毒11-12月检出率最高，但在3月份有一个小高峰;HBoV在7-10月检出率最高;AdV在7-12月份呈上升趋势。
　　③NOV、AdV、HPeV基因型别:
　　NOV基因型:24株NOV阳性株，根据序列分析，分成7种基因型，主要包括在广州地区首次检出的GⅡ.P16(1株，4.17％)、罕见型GⅡ.P17(2株，8.33％)、常见基因型GⅡ.Pe（15株，62.50％）、GⅠ.P2(2株，8.33％)、GⅡ.P7（1株，4.17％）、GⅡ.P8(1株，4.17％,1/24)、GⅡ.Pg(2株，8.33％)。
　　AdV基因型:43株AdV阳性株，分成5种型别，肠道病毒AdV41型(40株，93.02％)与AdV31型（1株，2.33％）;非肠道病毒包括AdV16型（1株，2.33％）、AdV1型（1株，2.33％）、AdV7型（1株，2.33％）、AdV2（1株，2.33％）。
　　HBoV基因型:30株HBoV阳性株，共分成2种型别，HBoV1（24株，80.00％），HBoV2（6株，20.00％）。
　　HPeV基因型:51株HPeV阳性株，分成5种型别，HPeV1A(12株，23.53％)、HPeV1B(26株，50.98％)、HPeV3(1株，1.96％)、HPeV4(3株，5.88％)、HPeV14(2株，3.92％)。
　　3.人双埃可病毒与腹泻关系的研究
　　(1)①HPeV与腹泻关系分析:腹泻组、健康组检出率分别为11.69(51/436)、2.91％(6/206)，两组检出率经卡方检验，差别有统计学意义（x2=13.345，P＜0.001），提示腹泻组HPeV检出率较健康组高。OR值为4.548，95％的OR值的可信区间为1.1919～10.776，提示HPeV与腹泻有关联。
　　②在不同年龄组、性别中HPeV感染分析:将腹泻组、健康组分别分成不同的年龄组（7岁以下、7岁以上），不同的性别（男、女）。在7岁以下年龄组，腹泻组及对照组检出率分别15.8％(48/304)、2.40％(2/83)，经卡方分析，差别有统计学意义（x2=8.250，P=0.004），OR值为7.594，95％的可信区间(1.086～31.935)，提示年龄与HPeV感染有关系。在男性中，腹泻组、健康组HPeV检出率分别为11.50％，1.87％，经卡方分析，差别有统计学意义(x2=8.754，P=0.003)，OR值为8.754，95％的可信区间(1.589～29.314)，提示男性可能与HPeV感染有关联。总OR值4.124较分层前4.416小。
　　(2)排除其他病毒感染后HPeV感染分析:
　　①共收集腹泻患者76名，对照组206名健康人群，HPeV检出率分别为10.53％(8/76)、2.91％(6/206)，两组检出率经卡方检验，差别有统计学意义(x2=6.821，P=0.009)，OR为3.92，95％可信区间(1.314，11.707)，说明HPeV与腹泻存在关联关系，提示HPeV是腹泻的一个危险因素。在7岁以下年龄组，腹泻组、对照组检出率分别16.67％(3/18)、2.40％(2/83)，经卡方分析，差别有统计学意义（P=0.004），OR值为7.594，95％的可信区间(1.173～49.163)，提示年龄与HPeV感染有关系。在女性中，腹泻组、健康组HPeV检出率分别为15.63％，4.04％，经卡方分析，差别有统计学意义（P=0.039），OR值为4.398，95％的可信区间(1.104～17.526)，总OR值3.922与分层前一样。
　　②HPeV流行情况及临床症状分析:在腹泻组（已排除其它病毒感染）共76例腹泻病人，检出率为10.53％(8/76)，在7、8、9月份中检出，检出率分别是20.00％(2/10)、33.33％(3/9)、50.00％(3/6)，9月份为高峰，而在1-6月份，10-12月都没有检出。76例腹泻病人根据有无感染HPeV分成两组，HPeV感染有8例，未感染HPeV有68例，比较其临床症状，两组发热率，经卡方检验，差别有统计学意义（P=0.043），提示两组发热率有差别，感染HPeV组较未感染HPeV组高。呕吐率、每日腹泻次数经统计学分析，差别无统计学意义(P分别为0.423、0.07)。
　　4.人群（腹泻患者、健康人群）HPeV阳性株序列分析、及各基因型流行特点。
　　结论：
　　1.腹泻患者中HRV仍然是主要病毒，但HPeV检出率也较其它5种病毒高，应值得重视。7种病毒(HRV、NOV、SaV、AstV、AdV、HBoV、HPeV)流行的季节主要在秋冬季，易感人群主要是0-7岁年龄组。
　　2.NOV病毒主要流行毒株是GⅡ.4/GⅡ.Pe，比往年不一样的是，此次监测中发现了较少见的GⅡ.P17、 GⅡ.P16型;其中GⅡ.P16型在广州地区首次检出。
　　3.HPeV与腹泻有关联，很可能是腹泻的一个危险因素，很可能加重腹泻的临床症状，7岁以下年龄段可能是一个易感人群。
　　4.HPeV1B进化关系较HPeV1A复杂，可能更容易变异或者重组，应引起重视。除此之外，HPeV3、HPeV4、HPeV14型祖先均来自国外分别为GQ183026-32(Netherlands)、DQ315670(Netherlands)、GU946796(Thailand)，国内对其可能没有免疫力。但应引起重视的是，HPeV1A可能加重腹泻的临床症状，GZ-141481有可能是一株变异株或重组株，或是新的基因型，有待进一步研究。

目录

摘要

第一章 2013-2014年广州市地区腹泻患者病毒分子流行病学分析

1 实验材料和方法

1．1 研究对象

1．2 实验材料

1．3 实验步骤与方法

1．4 统计学分析

1．5 质量控制

2 结果

2．1 腹泻患者基本情况

2．2 常见病毒检测出率

2．3 常见病毒流行病学特点

3 讨论

第二章 广州地区人双埃可病毒与腹泻关系的研究

1 实验材料和方法

1．1 研究对象

1．2 粪便标本收集及处理

1．3 主要材料

1．4 实验步骤与方法

2 结果

2．1 腹泻组与健康组的基本情况

2．2 HPeV在人群中检出率及流行病学特点

2．3 排除其它病毒感染的后在人群中的比较

3 讨论

第三章 腹泻患者与健康人群中人双埃可病毒基因型分析

1 实验材料和方法

1．1 研究对象

1．2 实验材料

1．3 实验步骤与方法

1．4 统计学分析

1．5 质量控制

2 结果

2．1 基本情况

2．2 HPeV感染情况及分型情况

2．3 不同HPeV型别在人群中流行病学特点

3 讨论

全文小结

参考文献

缩略表(Abbreviations)

附录

攻读学位期间成果

致谢

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