微环境中MDSCs异常分化与肿瘤细胞OXA药物反应的关联及机制初探

摘要

目的：
　　结直肠癌(colorectal cancer，CRC)是最常见的恶性肿瘤之一，具有高发病率、高死亡率的特征。CRC预后与肿瘤分期关系密切，早期CRC可通过手术方式清除病灶，5年生存率可达90％;晚期CRC患者只能采取以化疗为主的姑息治疗，但化疗耐药出现使化疗失败，降低患者的生活质量及缩短患者的生存期限。目前化疗耐药机制仍不是很清楚。近年来研究表明耐药与肿瘤微环境关系密切，而作为微环境中重要免疫调节者的髓源抑制细胞(myeloid-derivedsuppuressor cells，MDSCs)，其数量与分化异常可能是化疗耐药机制之一。目前研究显示不同化疗药物对MDSCs募集和分化影响尚存在争议。课题组前期研究发现瘤周MDSCs数量随化疗奥沙利铂(oxaliplatin，OXA)剂量增加而升高，并抑制瘤周MDSCs向M1样MDSCs的分化。本研究旨在明确奥沙利铂化疗微环境中奥沙利铂、肿瘤细胞与MDSCs三者的相互作用关系，以解释前期研究的MDSCs数量及分化变化现象，为解决奥沙利铂耐药问题提供新思路。
　　方法：
　　1.体外奥沙利铂及CT26细胞上清分别对MDSCs数量的影响
　　体外条件下原代骨髓细胞诱导为MDSCs，分别予以不同剂量奥沙利铂和CT26细胞上清处理，应用流式技术检测各组MDSCs凋亡细胞比例变化情况。
　　2.体外奥沙利铂及CT26细胞上清分别对MDSCs分化的影响
　　体外条件下诱导原代骨髓细胞为MDSCs，分别予以不同剂量奥沙利铂和CT26细胞上清处理，应用流式技术检测各组M1样MDSCs和M2样MDSCs比例变化情况。
　　3.MDSCs异常分化对CT26细胞OXA药物反应性的影响
　　收集体外诱导的M1、M2型巨噬细胞上清，并分别与CT26细胞共培，使用流式技术检测各组CT26细胞凋亡情况。应用细胞毒性实验、划痕实验、transwell小室等细胞功能实验观察M1、M2型巨噬细胞的上清对CT26侵袭转移能力的影响。
　　4.统计学方法：
　　采用SPSS22.0统计软件分析实验数据。计量资料以均数±标准差表示，组间比较若满足正态分布和方差齐采用两独立样本t检验，否则采用Wilcoxon秩和检验。计数资料组间比较采用两独立样本率的x2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。
　　结果：
　　1.随着奥沙利铂剂量的增加，MDSCs的凋亡细胞比例明显增加。在与CT26细胞上清共培时，奥沙利铂诱导的MDSCs凋亡细胞比例明显减少，活细胞比例明显增加。
　　2.随着奥沙利铂浓度增加，M1样MDSCs的比例明显下降;低剂量奥沙利铂促进M2样MDSCs比例增加，而高剂量奥沙利铂对M2样MDSCs比例无明显影响。CT26细胞上清促进M2样MDSCs比例增加，但对M1样MDSCs比例无明显作用。
　　3.加入M2型巨噬细胞上清后，奥沙利铂诱导的CT26细胞凋亡比例明显减少;而加入M1型巨噬细胞上清后，奥沙利铂诱导CT26细胞凋亡比例增加。与M2型巨噬细胞上清共培时，CT26奥沙利铂IC50及迁移能力明显增加，而M1型巨噬细胞上清共培时则相反。
　　结论：
　　1.奥沙利铂促进MDSCs凋亡，且具有剂量依赖性。而CT26细胞则通过：①抑制奥沙利铂对MDSCs的杀伤作用;②促进MDSCs向瘤周的趋化募集，加速MDSCs在瘤周的募集。
　　2.低剂量奥沙利铂及CT26细胞均可促进MDSCs向M2型巨噬细胞分化;此外，奥沙利铂抑制MDSCs向M1型巨噬细胞分化，而CT26细胞对MDSCs向M1型巨噬细胞分化无明显作用。
　　3.M2型巨噬细胞上清减弱奥沙利铂对CT26细胞的杀伤作用，提高CT26细胞对奥沙利铂的耐药性，而M1型巨噬细胞上清则相反。此外，M2型巨噬细胞上清增加CT26细胞的迁移能力。

目录

摘要

第一章 前言

1．实验材料和试剂

2．实验仪器

3．实验方法

4．统计分析

第三章 结果

一、奥沙利铂化疗肿瘤微环境中肿瘤细胞及奥沙利铂分别对MDSCs数量的调控影响

二、奥沙利铂化疗肿瘤微环境中肿瘤细胞及奥沙利铂分别对MDSCs分化的调控影响

三、MDSCs异常分化为M1、M2型巨噬细胞对CT26细胞OXA药物反应性的影响

第四章 讨论

参考文献

中英文缩略词表

成果

致谢

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