bFGF单抗联合Lobaplatin抑制肺腺癌细胞增殖、转移和诱导凋亡的机制研究

摘要

目的：(1)探讨碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体（bFGF单抗）联合Lobaplatin(LBP)对肺癌细胞系A549细胞增殖、凋亡和转移的影响及其可能的作用机制。
　　(2)系统评价Lobaplatin联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌（NSCLC）的疗效和安全性。
　　方法：制备腹水型bFGF单抗,体外培养肺腺癌A549细胞，将细胞分为四组（control组、bFGF单抗组、LBP组及bFGF单抗+LBP组）处理48h。
　　（1）CCK-8法测定其对A549细胞增殖的影响；流式细胞仪检测药物作用后细胞周期分布的变化，Western blot法检测细胞周期相关蛋白CDK4和cyclin D的表达水平。
　　（2）流式细胞仪检测药物作用A549细胞凋亡，DAPI染色激光共聚焦显微镜下观察细胞凋亡过程中细胞核的变化，western blot法检测细胞凋亡PI3K/Akt信号通路有关蛋白bcl-2、caspase-3、caspase-9、PARP及BAX、cleave-caspase-3、cleave-caspase-9、cleave-PARP的表达变化。
　　（3）划痕实验及Transwell小室检测不同药物分组对A549细胞侵袭及迁移能力的影响，Western blot法检测细胞侵袭迁移相关蛋白MMP-2和MMP-9的表达。（4）计算机检索Cochrane Library、PubMed、EMBase、中国期刊全文数据库(CNKI)、中国生物医学文献数据库（CBM）、维普中文期刊数据库、万方数据库，纳入LBP联合化疗对比顺铂联合化疗治疗晚期NSCLC的随机对照试验（PCT），根据纳入与排除标准筛选后，运用改良后的Jadad量表评价纳入文献的方法学质量，并采用Cochrane协作网提供的Rev Man5.2统计学软件进行Meta分析。
　　结果：
　　（1）CCK-8结果显示不同的药物分组可抑制A549细胞的增殖，并以bFGF单抗+LBP对肺癌A549细胞增殖作用最为明显，流式细胞仪检测结果发现bFGF单抗联合LBP可抑制A549细胞周期的进行，阻止细胞周期在G0/GI期。Western blot检测结果表明bFGF单抗和LBP可下调细胞内CDK4和cyclin D的表达。（2）流式细胞仪检测结果显示bFGF单抗，LBP单独及联合可诱导A549细胞凋亡。DAPI染色激光共聚焦显微镜下发现可引起细胞核固缩、核裂解。Western blot结果表明bFGF单抗联合LBP通过下调bcl-2、casepase-3、casepase-9、PARP的表达，上调BAX、cleave-casepase-3、 cleave-casepase-9、 cleave-PARP的表达来诱导A549细胞的凋亡。
　　（3）划痕实验和Transwell小室基质胶实验显示bFGF单抗，LBP单独及联合可抑制A549细胞侵袭迁移能力。Western blot检测结果发现药物作用后可下调MMP-2和MMP-9蛋白表达来阻断细胞的侵袭迁移。
　　（4）共纳入11项RCT，合计724例患者。Meta分析结果显示，试验组患者的客观缓解率[ RR=0.96，95％CI(0.79，1.16)，P=0.65]、白细胞减少发生率[ RR=0.95.，95%CI(0.83，1.08)，P=0.42]和血小板减少发生率[ RR=0.96，95%CI(0.80，1.15)，P=0.68]与对照组比较差异无统计学意义；但试验组患者恶心呕吐发生率[RR=0.55，95%CI(0.46，0.64)，P＜0.05]、腹泻发生率[ RR=0.43，95%CI(0.31，0.61)，P＜0.05]显著低于对照组，两组比较差异有统计学意义。
　　结论：
　　（1）bFGF单抗联合LBP作用于细胞48h后可抑制肺腺癌A549细胞的增殖，阻止细胞由G1期进入S期、G2期进入M期，其作用机制可能是下调细胞内CDK4和cyclin D的表达发挥生物学作用。
　　（2）bFGF单抗联合LBP作用于细胞48h后可促进肺腺癌A549细胞的凋亡，形态学观察可以看到引起细胞核固缩、核裂解，其机制可能与改变细胞内PI3K/Akt信号通路，下调bcl-2、casepase-3、casepase-9、PARP的表达，上调BAX、cleave-casepase-3、 cleave-casepase-9、 cleave-PARP的表达有关。
　　（3）bFGF单抗和LBP单药和联合作用均可阻止肺腺癌A549细胞的转移，两药联合应用对A549细胞具有协同作用。这一效应可能与特异性的引起基质金属蛋白酶MMP-2和MMP-9表达变化有关。
　　（4）LBP联合化疗治疗NSCLC患者的疗效与顺铂联合化疗相当，但安全性优于后者。由于纳入研究的样本量偏小，质量较低，该结果尚需大样本、多中心的RCT进一步验证。

目录

封面

声明

中文摘要

英文摘要

目录

前言

1.1 材料

1.2 实验方法

1.3 实验结果

1.4 讨论

第二部分 bFGF单抗与Lobaplatin联合抑制肺腺癌A549细胞增殖的研究

2.1 材料

2.2实验方法

2.3实验结果

2.4讨论：

第三部分 bFGF单抗与Lobaplatin联合诱导肺腺癌A549细胞凋亡的研究

3.1材料

3.2实验方法

3.3实验结果

3.4 讨论：

第四部分 bFGF单抗与Lobaplatin联合抑制肺腺癌A549细胞侵袭迁移作用的研究

4.1材料

4.2 实验方法

4.3 实验结果

4.4 讨论

参考文献

第五部分Lobaplatin对比顺铂治疗晚期非小细胞肺癌的疗效与安全性的Meta分析

1 资料与方法

2 结果

3 讨论

参考文献

全文总结

附录

硕士期间发表论文

致谢