PEG化脂质纳米粒促进非诺贝特口服吸收的研究

摘要

脂质纳米粒(Lipid nanoparticles)是在脂质体、微乳等纳米载体基础上逐渐发展起来的一种新型药物递送载体。因其载药量高、载体材料生物相容性好、粒径小及相对表面积大、能增加制剂在肠系黏膜的黏附性等多方面优势，从而能够显著提高药物的口服生物利用度，在难溶性药物口服给药方面受到广泛的关注。
　　普通脂质纳米载体（非 PEG化）口服后易被胰脂肪酶降解，使包载于其中的药物快速析出或暴露在胃肠道环境中受到酶降解，因而影响药物的口服吸收，导致生物利用度差异性较大。对药物结构进行PEG化改造或使用PEG化材料制备药物载体被证实也能够增加药物的生物利用度。但是，PEG化脂质纳米载体如何影响荷载药物的口服吸收机制尚不十分清晰。
　　在本研究中，我们采用不同方法制备载非诺贝特（Fenofibrate，FN）的PEG化脂质纳米载体（PEGylated lipid nanocarriers，PLNs）和普通脂质纳米载体（Conventional lipid nanocarriers，CLNs），通过比较两者在体外含胰脂肪酶和不含胰脂肪酶的介质中的释放、脂解情况，验证并解释了PEG化对脂质纳米载体的保护作用；并研究PLNs和CLNs经口服后在大鼠胃肠道中的吸收情况，从而阐述脂质纳米载体的PEG化对模型药物非诺贝特的吸收影响。
　　第一章，建立非诺贝特的分析方法，结合所制备脂质纳米载体的特点，采用离心超滤法测定其包封率。并且对含量测定进行方法学验证，为下一步脂质纳米载体制备的处方筛选和工艺研究奠定了良好的基础。含量测定试验结果表明：建立的实验方法能满足研究的需要，FN液相图谱峰形良好,辅料对药物测定无干扰。
　　第二章，以BCSII类药物FN为模型药物，采用溶剂扩散法制备载FN的PLNs（FN-PLNs）。以载体的粒径和多分散系数（PDI）为指标，考察了处方各组分比例对制剂的影响，并通过形态特征、傅立叶红外光谱学和体外释放情况对制剂进行表征研究。结果表明：FN-PLNs粒径为186.7 nm（PDI=0.207），包封率>95％。处方中各组分比例显著影响PLNs的粒径、稳定性和包封率。FN-PLNs通过透射电镜观察显示为球形或类球形结构，大部分粒子小于342 nm，分散均匀，无特别大的粒子存在。以0.5%SDS溶液为释放介质，采用逆相平衡透析法考察体外释药情况，结果显示FN-PLNs与FN-CLNs的体外释药并无显著区别，两者相似性因子f2值为58，说明两者具有相似的释放行为。
　　第三章，通过脂质纳米载体胃肠道转运行为研究，考察了FN-PLNs和FN-CLNs在胃肠道转运中的命运。脂质纳米载体与大鼠小肠提取液经37℃孵育后，观察载体粒径的变化；通过在释放介质中加胰脂肪酶，计算体外释放过程中药物累积释放率；通过体外模拟体内肠液环境进行胰脂肪酶脂解实验，进一步验证脂质纳米粒的PEG化对脂解的阻滞作用。结果表明：相对于普通脂质纳米载体，在大鼠小肠液中孵育后，FN-PLNs粒径改变明显小于 FN-CLNs；在体外含有胰脂肪酶的释放体系中，1 h后总累积释放率两者没有显著的区别，但在前20 min中，FN-CLNs的药物释放率明显高于FN-PLNs，两者相似性因子f2值为33，说明两者的释放有明显的区别；体外脂解实验结果显示 FN-PLNs粒径改变明显小于FN-CLNs；说明了PEG化的脂质纳米粒能够减少粘蛋白的黏附和抑制胰脂肪酶对脂质材料的降解。
　　第四章，采用大鼠灌胃法观察制剂在大鼠体内的药动学情况。以市售Lipanthyl?胶囊内容物作为参比制剂，考察FN-PLNs和FN-CLNs的相对生物利用度。结果表明：与市售微粉化制剂的生物利用度做对比，FN-PLNs和FN-CLNs的相对利用度分别为157.0%和123.9%。FN-PLNs的血药浓度-时间曲线下面积（AUC0–t＝51.04μg?h/mL）比 FN-CLNs（AUC0–t＝41.19μg?h/mL）和市售Lipanthyl?胶囊内容物（AUC0–t＝32.52μg?h/mL）的均显著提高，说明通过PEG化的脂质纳米载体递送药物，能显著地增加非诺贝特的生物利用度。根据前面的研究结果，分析了脂质载体的体外释放和体内吸收之间的体内外相关性（IVIVC），初步阐释脂质纳米载体的PEG化如何减少粘蛋白的黏附和抑制胰脂肪酶对脂质材料的脂解速率，从而进一步改善 BCSII类药物的口服生物利用度。
　　通过本研究，能较好的理解脂质纳米载体在体内的处置过程，当载药脂质纳米粒经 PEG脂质材料修饰后，能减少胃肠道游离粘蛋白对纳米粒的黏附和延缓脂肪酶对脂质的降解作用，因而能有效的提高口服药物的生物利用度。本文对脂质纳米粒的体内行为进行了探索性观察，结合药动学研究初步了解到脂质纳米粒的PEG化能够改善难溶性药物的口服吸收，本研究可为BCS II类药物口服剂型的开发提供一定的参考价值。

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前言

第一章 非诺贝特分析方法的建立

1 试剂与仪器

2 实验方法

3 结果与讨论分析

本章小结

第二章 PEG化脂质纳米载体的制备与表征

1 试剂与仪器

2 实验方法

3 结果与讨论

本章小结

第三章 脂质纳米载体胃肠道转运行为的研究

1 试剂与仪器

2 实验方法

3 结果与讨论

本章小结

第四章 脂质纳米载体大鼠体内药动学研究

1 仪器与材料

2 方法与结果

3 结果与讨论

本章小结

全文总结

参考文献

在校期间发表论文情况

致谢