琼枝麒麟菜海藻多糖(EGP)提取工艺优化及其生物活性的研究

摘要

本文采用超声提取方法提取琼枝麒麟菜多糖(EGP)，以EGP得率为考察指标，对其提取条件包括提取时间，提取温度以及料液比进行系统研究和单因素优化处理，最后得到最佳提取条件，并对该条件进行验证。在最优条件下获得EGP样品进行以下实验：（1）EGP定性鉴定包括：溶解实验、茚三酮反应实验、碘-碘化钾反应实验、红外光谱分析实验；（2）紫外分光光度法测定核酸及蛋白质含量；（3）苯酚-浓硫酸法测定EGP中多糖的含量；（4）生物活性评价，进一步探讨EGP在化妆品行业的应用：通过MTT细胞毒性实验、ELISA实验、细胞增殖实验和划痕实验，研究EGP对人永生化表皮细胞（HaCaT）形态、增殖分化和细胞迁移速度以及促细胞生长因子羟脯氨酸（Hyp）和Ⅰ型胶原蛋白（COL-Ⅰ）的影响，评价其在皮肤损伤修复方面的作用。采用流式方法和ELSIA实验分别探究 EGP对HaCaT细胞株抗氧化方面中活性氧簇ROS和NO的影响。使用LPS诱导单核巨噬细胞株（RAW264.7细胞），研究EGP对炎症性反应中炎性因子（包括TNF-a、IL-1β等）表达情况的影响。通过物理研究方法研究多糖的保湿性和吸湿性，并从紫外屏蔽和吸收等方面探讨琼枝麒麟菜多糖在化妆品方面工业应用价值。探究EGP对各种肿瘤细胞株包括HeLa细胞株、SiHa细胞株、BT474细胞株、CaSiKa细胞株以及9706细胞株肿瘤细胞增殖的抑制作用。
　　结果：确定EGP的最优超声提取条件为：温度60℃，料液比1:100，时间30 min，EGP得率为40.3％。EGP溶解实验、茚三酮反应实验、碘-碘化钾反应实验、红外光谱分析实验的结果均为多糖物质的阳性结果，证明提取物含有多糖物质，其中多糖含量为48.2%±4.6%。EGP对HaCaT细胞几乎无毒，并且在一定浓度范围内EGP对HaCaT细胞的增殖有显著的促进作用；EGP还能加快HaCaT细胞的迁移速度，并且EGP组促细胞生长因子羟脯氨酸（Hyp)在24 h时含量145.09±16.7?g/L明显高于Normal组（110.72±8.7μg/L）和bFGF（110.72±8.7μg/L）组。EGP组中促细胞生长因子Ⅰ型胶原蛋白（COL-Ⅰ）在0 h含量最高为（68.81±4.3μg/L），明显高于Normal组（21.08±2.1μg/L）和bFGF（27.91±1μg/L）组，对皮肤损伤的愈合有显著的促进作用。EGP抗炎模型的研究中，EGP对i NOS炎症性因子具有一定的抑制作用。并且EGP能有有效的抑制活性氧簇ROS的产生以及显著抑制NO的分泌，具有一定的抗氧化及抗炎功效。EGP还具有一定的紫外吸收和屏蔽的效果，并呈现一定的浓度依赖性。EGP在吸湿性方面具有一定的效果，在80%的湿度环境下吸湿率能达到11.69%，但是在保湿性方面效果不显著。EGP对肿瘤的抑制作用不明显，无统计学意义的差别。
　　结论：超声法提取 EGP时间短，工艺稳定。EGP毒性小，对皮肤及粘膜损伤的修复具有促进作用，并能起到物理隔离的效果，可应用于化妆品及医疗器械。

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第一部分 前言

1.1海藻麒麟菜简介

1.2多糖研究简介

1.2.1多糖提取方法概述

1.2.2多糖生物活性研究概述

1.2.3多糖应用概述

1.3研究目的

1.4研究内容

1.5研究创新点

1.6技术路线

第二部分 实验材料和实验方法

1 实验材料

1.1仪器设备

1.2实验材料

1.3试剂配制方法

2 实验方法

2.1琼枝麒麟菜多糖工艺研究

2.2琼枝麒麟菜多糖生物活性功效的研究

第三部分 实验结果

1.1琼枝麒麟菜多糖提取工艺研究

1.1.1水提取法和超声波提取法对多糖提取率的影响结果

1.1.2正交实验单因素考察

1.1.3琼枝麒麟菜多糖相关指标的测定

1.2琼枝麒麟菜多糖生物活性功效的研究

1.2.1琼枝麒麟菜多糖抗衰老活性的研究

1.2.2琼枝麒麟菜多糖抗炎活性的研究

1.2.3琼枝麒麟菜多糖抗肿瘤活性的研究

第四部分 结论与讨论

结论与展望

讨论

参考文献

在读期间发表论文

致谢