健脾活血法对糖尿病胃轻瘫大鼠胃动力基本功能单位的影响

摘要

目的：鉴于胃的血流是保障胃动力顺利的关键，因此我们拟通过血流干预药物及健脾活血法之代表方“糖胃康”对糖尿病胃轻瘫大鼠胃动力基本功能单位(胃壁内神经系统、Cajal间质细胞及平滑肌细胞)的影响，揭示糖尿病胃轻瘫发病的内在机制及血流因素在糖尿病胃轻瘫发病机制中的作用，并部分明确“糖胃康”治疗糖尿病胃轻瘫的作用部位、环节及分子机制，为中药防治糖尿病胃轻瘫开辟新方法和理论依据，为临床治疗糖尿病胃轻瘫提供一个有效的中药制剂。 方法：131只SPF级SD雄性大鼠，随机分为5组，其中正常组10只、模型组22只、止血敏组33只、蚓激酶组33只和糖胃康组33只。所有动物禁食12h后，测空腹血糖，剔除血糖过高或偏离正常值较大的动物，称重。除正常对照组大鼠外，其它大鼠一次性腹腔注射0.1mmol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液链脲佐菌素(STZ)造模，注射剂量60mg/kg，正常对照组大鼠单次腹腔注射等容量的0.1mmol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液。 至造模后第7天，所有实验大鼠在非禁食情况下剪尾采血，用血糖仪测血糖值，以血糖≥16.7mmol/L为实验纳入标准。符合实验纳入标准大鼠于造模后第10天起，糖胃康组大鼠予“糖胃康”水煎剂灌胃，每日1次；止血敏组大鼠予止血敏注射液灌胃，每日1次；蚓激酶组大鼠予蚓激酶肠溶胶囊腹腔注射，每日1次；模型组和正常组大鼠予等量蒸馏水灌胃，每日1次。每周给药6天。所给药物剂量采用不同种属、不同体重动物剂量换算公式计算，相当于成人临床常用剂量2倍。每天观察并记录动物一般状态(包括饮食、排泄物、分泌物、毛发、精神状态、自主运动、眼白内障、死亡等的变化)。每3周称体重1次，按新体重重新计算给药剂量。实验期为30周。5组大鼠以复合颗粒饲料喂养，自由取食、自由饮水。 实验17周时所有大鼠用血糖仪检测空腹血糖1次。30周后所有大鼠禁食24h后，先用血糖仪测空腹血糖，而后各鼠均给予5ml酚红溶液(1mg/ml)灌胃，30分钟后乙醚麻醉，开胸，心脏取血6ml，不加抗凝剂，4℃自然凝固后，3500rpm-1离心10分钟，取上清，-20℃冰箱保存备用，用于检测血清胰岛素水平、血清C肽水平、血脂(TC、TG、LDL、HDL)及血自由基含量(SOD、MDA)等生化指标；取血4ml，加肝素抗凝，37℃条件下测定血液流变学各项指标。而后拉颈处死大鼠，迅速剖腹，结扎胃贲门和幽门，取出全胃放置于冰上，沿胃大弯侧剪开胃，将胃内残留物收集，用722光栅分光光度计以560nm波长下读取光密度值，计算大鼠胃液体排空率。随即取大鼠胃窦区组织2块，大小约1.0cm×1.0cm，其中1块放入10％中性甲醛固定液中，另1块放入4％多聚甲醛固定液中固定，而后脱水、透明、石蜡包埋、切片、拷片、行HE染色、特殊染色(Masson染色、Mallory染色、甲苯胺蓝染色)和免疫组化染色，光镜下观察胃组织微血管形态和微血管密度变化，胃窦肌间神经丛中神经元细胞数、神经元内尼氏小体的变化，胃窦组织神经递质SP、VIP、5-HT、nNOS变化，胃窦组织Cajal间质细胞的形态及数量变化，胃窦组织平滑肌细胞形态变化、平滑肌细胞凋亡以及凋亡调控基因Bcl-2和Fax基因蛋白的表达；另取大鼠胃窦区组织1块，大小约0.5cm×0.5cm，立即置含0.2％戊二醛、4％多聚甲醛的磷酸缓冲液固定，进行透射电镜制样，电镜下观察胃窦组织Cajal间质细胞、平滑肌细胞、壁内神经系统和微血管超微结构改变以及Cajal间质细胞、平滑肌细胞和壁内神经系统三者之间的关系。取胰尾腺体组织，10％甲醛溶液固定，而后脱水、透明、石蜡包埋、切片、拷片、行HE染色和醛品红-亮绿橙黄G染色，光镜下观察胰岛和胰岛β细胞变化。 结果：1.大鼠糖尿病和糖尿病胃轻瘫模型的建立及血流干预药物和“糖胃康”对它们的影响本实验造模前各组大鼠血糖水平和体重无差异，造模7天后，正常组大鼠血糖均值为3.20mmol/L，造模组血糖≥16.7mmol/L的111只大鼠血糖在16.72-24.1mmol/L 结论：1.本实验结果说明，血流变化因素与糖尿病胃轻瘫发病机理间存在一定的关系，但不是主要的发病机制。在治疗时或许可通过改善微循环而达到促进胃动力的作用。 2.我们推测糖尿病胃轻瘫的发病机制可能为糖尿病发生时，由于糖代谢障碍、高脂血症及血浆纤维蛋白原增加，导致血液流变性异常，这使胃肠道微血管管壁增厚，结构受到破坏，血流淤滞，造成胃肠道缺血，致使Cajal间质细胞、神经细胞、平滑肌细胞、黏膜细胞缺血，能量供应减少，能量匮乏，引致细胞膜系统受损，胞质溶解，线粒体肿胀，空泡样变，从而使这些细胞的功能严重受损以及破坏了肌间神经丛多种神经递质的平衡，促使糖尿病时胃肠道的并发症出现。其中胃肠动力基本功能单位的病理改变和(或)功能异常可能是糖尿病胃动力障碍发生的关键性局部机制。 3.本研究结果表明，“糖胃康”具有降血糖和促进胃动力双重作用，是一个对糖尿病胃轻瘫治疗有确切疗效的中药制剂。我们推测“糖胃康”治疗糖尿病胃轻瘫的机理可能是通过其降糖，降脂，改善血液流变性，促进血液循环，增加血流量，使胃肠道的微血管、Cajal间质细胞、神经细胞、平滑肌细胞的病变改善，胃肠道局部兴奋性神经递质SP和(或)5-HT增加，而降低抑制性神经递质VIP和(或)NO对胃肠道的作用，胃肠动力基本功能单位的病理改变和(或)功能异常得到恢复从而达到促进胃肠运动的作用。

目录

文摘

英文文摘

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引言

第一部分文献研究

第二部分“糖胃康”的组成、组方依据及药物制备

第三部分实验研究

第四部分讨论

结语

参考文献

附录一：照片

附录二：缩略表

附录三：在学期间发表与课题相关的文章

致谢