不同证候群大肠癌癌旁不同部位组织的相关间质分子特征比较

摘要

目的: 通过比较分析不同证候群（虚、实证）大肠癌早期细胞间质的分子特征，以及距离大肠癌癌旁不同部位组织中其相关间质分子的表达差异，以探讨肿瘤微环境与大肠癌发生的相关性，为临床防治大肠癌提供有力的线索及寻找新的抗癌靶点，并为大肠癌的中医辨证提供有效的生物学基础，从而为中医药防治大肠癌提供正确的用药指导。 研究方法: 实验收集20例结肠中分化腺癌标本（湿热蕴结证和脾肾阳虚证各10例），从距离大肠癌病灶近端10cm，5cm，2cm获取组织样本，并分别命名为1，2，3号位组织样本，用HE染色观察不同部位组织的隐窝结构，用免疫组化以及Western Blot检测三个部位组织中细胞外间质分子(E-cad、HYAL1、ColⅠ)的表达及分布情况。然后对不同证候间以及距离肿瘤不同部位组织间的相关间质分子的表达及分布进行比较分析，从而得出相关结论。 研究结果: 1.HE染色发现，距离肿瘤不同部位的组织其隐窝结构存在较大的差异:1号位组织的隐窝结构基本正常，隐窝的大小、形态正常，隐窝中的细胞排列整齐，由柱状上皮和杯状细胞组成;2号位组织的隐窝或完全消失或部分残存，隐窝形态改变，隐窝较大，腺腔不规则，细胞核增大、拉长，细胞排列紊乱，出现分层现象;3号位组织隐窝发育异常且异型增生，隐窝宽大，隐窝腔不规则，上皮细胞核质比例增加，细胞核着色过深，细胞排列拥挤，并出现上皮细胞层化、极性消失现象。 2.免疫组化发现:相关间质分子（Col-1、HYAL1、E-cad）在距肿瘤不同部位组织其表达和分布存在差异:Col-1主要表达在粘膜上皮层、粘膜下层的结缔组织中，在隐窝之间亦存在少量表达，其在1、2、3号位的校正光密度值(COD)分别为1.8453±0.2586，1.9723±0.2091; HYAL1主要表达在粘膜下层的结缔组织之间，其在三个部位的校正光密度值分别为1.5823±0.2686，1.8715±0.2016，1.8095±0.1970;E-cad主要表达在细胞膜和胞浆中，其在三个部位的校正光密度值2.0819±0.2347,1.8224±0.2384,1.7586±0.3511。 3.Western Blot检测发现:E-cad在1、2、3号位的表达呈递减，其表达量分别为:5.5635、1.9875、0.9210; ColⅠ、HYAL1在2号位的相对表达量最高，其在1、2、3号位的相对表达量分别为:1.3119、2.4604、0.8699;1.4635、2.5462、0.8646。 4.免疫组化分析发现:不同证候的相关间质分子(E-cad、ColⅠ、HYAL1)的表达存在一定的差异，湿热蕴结证的表达量高于脾肾阳虚证，但两组之间的数据比较无统计学意义。 结论: 1.通过HE染色发现，在越靠近肿瘤部位的组织，其隐窝结构的损害越大，ACF（异常隐窝灶）越突出且多。 2.通过免疫组化、Western Blot发现，E-cad在1、2、3号位的表达呈递减趋势，ColⅠ、HYAL1在2号位的表达量最高，其在3个部位的表达趋势为先递增后递减。细胞外间质和肿瘤微环境在大肠癌的启动及演进过程中发挥了重要作用。 3.不同证候的相关间质分子(E-cad、ColⅠ、HYAL1)的表达存在一定的差异，湿热蕴结证的表达量高于脾肾阳虚证，E-cadherin的表达与肿瘤病理分期呈一定的正相关，而ColⅠ、HYAL1的表达与肿瘤病理分期呈一定的负相关。

目录

论文说明

声明

摘要

引言

第一章 文献研究

1．1 中医对大肠癌的认识

1．2 西医对大肠癌的认识

1．3 隐窝与异常隐窝病灶

1．4 肿瘤微环境的研究进展

1．5 细胞外基质与大肠癌的关系

1．5．1 透明质酸酶与大肠癌

1．5．2 胶原蛋白与大肠癌

1．5．3 E-钙粘蛋白与大肠癌

第二部分 大肠癌中医证型的微观和客观化临床研究

2．1 资料与方法

2．1．1 一般资料

2．1．2 研究方法

2．2 结果

2．2．1 中医证型与肿瘤病理分期、肿瘤浸润深度、肿瘤转移的关系

2．2．2 中医证型与血清肿瘤标志物的关系

2．2．3 化疗前后的证型变化和症状改变

2．2．4 大肠癌手术前后的证型变化以及血分析(淋巴细胞)、生化的改变等

2．3 讨论

第三部分 实验研究

3．1 材料与方法

3．1．1 组织样本

3．1．2 主要方法

3．2 统计学处理

3．3 结果

3．3．1 组织形态学观察与分析

3．3．2 免疫组化结果

3．3．3 Western-blot结果

3．4 讨论

结语

参考文献

附录

在校期间发表论文情况

致谢