湿热质CKD1期与ICAM-1基因多态性和血清sICAM-1表达的相关性研究

摘要

目的:探讨湿热质慢性肾脏病1期患者与ICAM-1基因G241R、 K469E位点的多态性，以及血清sICAM-1表达的相关性。分析湿热体质、CKD1期、湿热质CKD1期这三者的ICAM-1基因的基因型差异，以及血清sICAM-1水平的差异，比较不同的基因型对血清sICAM-1表达的影响。探讨通过ICAM-1基因多态性及血清sICAM-1水平检测对于早期慢性肾脏病以及湿热体质的诊断带来的临床意义。
　　方法:
　　1.在肾内科住院病房和慢病门诊中对CKD1期患者进行中医体质辨识，符合纳入和排除标准的患者纳入，分湿热质CKD1期组、平和质CKD1期组。在体检中心或者健康调养门诊中对健康人群进行中医体质辨识，符合纳入和排除标准的人群纳入，分湿热质健康组、平和质健康组。
　　2.纳入对象知情同意后抽取静脉血。对每个全血样本进行基因组DNA提取，用紫外分光光度计检测基因组DNA的纯度与浓度，进行目的片段PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳验证是否为目的片段基因，最后送生物公司进行基因碱基测序，根据测序峰图判断ICAM-1基因G241R、 K469E位点的基因型。分析四个组的ICAM-1基因G241R、 K469E位点的基因型及等位基因频率的差异性，探讨该差异性与湿热质CKD1期的相关性，通过遗传平衡定律检验群体代表性。
　　3.对血清样本进行ELISA法检测sICAM-1浓度。分析四个组血清sICAM-1浓度差异，探讨该差异性与湿热质CKD1期的相关性，以及该差异性与ICAM-1基因G241R、K469E位点多态性的相关性。
　　结果:
　　1.共纳入117例研究对象，分CKD1期组66例以及健康组51例，CKD1期组包括原发性肾小球肾炎（52例）、狼疮性肾炎（8例）、慢性肾盂肾炎（6例）三个病种，四个研究组的年龄均数相等，年龄因素未对研究造成影响。
　　2.总体研究对象的ICAM-1基因G241R、 K469E位点的基因型在实际观察频数与理论频数中无统计学差异，符合遗传平衡定律（P＞0.05）。
　　3.在总体研究对象中，ICAM-1基因G241R位点各基因型频率分别为GG型0.692、GR型0.308，RR型均未检测出，等位基因G、R频率分别为0.846、0.154;各基因型在四个研究组中的分布相同，两个等位基因在四个研究组中的分布相同。
　　4.在总体研究对象中，ICAM-1基因K469E位点各基因型频率分别为KK型0.59、KE型0.376，EE型0.034，等位基因K、E频率分别为0.778、0.222;在CKD1期患者中，湿热质患者的KE、 EE基因型频率较平和质患者高（0.455vs0.273、0.121 vs0），而KK基因型频率则较低（0.424vs0.727），湿热质患者等位基因E频率较平和质患者高（0.348vs0.136），等位基因K频率较平和质患者低（0.652 vs0.864）;在湿热质人群中，CKD1期患者的KE、 EE基因型频率较健康者高（0.455vs0.32、0.121 vs0），而KK基因型频率则较低(0.424vs0.68)，CKD1期患者等位基因E频率较健康者高（0.348vs0.16），等位基因K频率较健康者低（0.652vs0.84）。
　　5.四个研究组间血清sICAM-1浓度总体分布不全相同，湿热质CKD1期组对比平和质CKD1期组血清sICAM-1呈高表达，湿热质CKD1期组对比平和质健康组血清sICAM-1呈高表达，湿热质健康组对比平和质CKD1期组血清sICAM-1呈高表达，湿热质健康组对比平和质健康组血清sICAM-1呈高表达。
　　6.四个研究组中，ICAM-1基因G241R位点GG、 GR基因型的血清sICAM-1表达水平相同;湿热质CKD1期组中，K469E位点ME基因型血清sICAM-1表达水平较KK基因型高，其余研究组中，KK、 KE基因型的血清sICAM-1表达水平相同。
　　结论:
　　1.ICAM-1基因G241R、 K469E位点多态性分布在实际观察频数和理论频数中未表现出差异性，符合遗传平衡，本研究的样本量可代表一个群体。
　　2.总体研究对象ICAM-1基因G241R、 K469E两个位点的基因型以GG/GR型、KK/KE型为主，等位基因以G、K为主。G241R位点多态性在四个研究组的分布相同，未表现出与湿热质、CKD1期的相关性。K469E位点E等位基因可能是湿热体质、CKD1期的危险因素，KE/EE基因型者可能表现出对湿热、慢性肾脏病的易感性。
　　3.湿热质可能是引起血清sICAM-1高表达的独立危险因素，而CKD1期未表现出与血清sICAM-1高表达的相关性。
　　4.ICAM-1基因G241R位点基因型与血清sICAM-1表达无明显相关性。K469位点E等位基因可能对血清sICAM-1表达有增强作用，可能是血清sICAM-1高表达的一个遗传危险因素，而含有E等位基因的KE型杂合子同样具有增强血清sICAM-1作用。

目录

声明

摘要

引言

第一章 文献研究

第一节 慢性肾脏病的现况

一、流行病学研究

二、病因及发病机制

第二节 IGAM-1基因多态性及表达

一、ICAM-1基因多态性

二、表达与调控

三、结构及生物学特性

第三节 ICAM-1与慢性肾脏病

一、ICAM-1与肾小球炎性病变

二、ICAM-1与肾小管损伤

三、ICAM-1与肾间质纤维化

第四节 中医体质学说与慢性肾脏病

一、中医体质学说

二、中医对慢性肾脏病的认识

三、中医体质学在慢性肾脏病中的应用

第五节 湿热体质与早期慢性肾脏病

第二章 湿热质CKD1期与ICAM-1基因多态性的相关性研究

第一节 前言

第二节 资料与方法

一、实验试剂和仪器

二、研究方法

三、统计学处理方法

第三节 结果

一、基因组DNA的纯度和浓度检测结果

二、PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果

三、PCR产物碱基测序结果

四、一般临床资料

五、基因型及等位基因频率分布

六、Hardy-Weinberg检验

第五节 结论

第三章 湿热质CKD1期与血清sICAM-1表达的相关性研究

第一节 前言

第二节 材料与方法

一、实验试剂和仪器

二、实验原理

三、研究方法

四、统计学处理方法

第三节 结果

一、标准曲线

二、组间血清sICAM-1浓度对比结果

三、不同基因型间血清sICAM-1水平的对比

第五节 结论

结语

参考文献

附录

在校期间发表论文情况

致谢