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第一章:文献综述
1.1 燃料乙醇
1.1.1 世界燃料乙醇产业概况
1.1.2 我国乙醇产业的现状
1.1.3 燃料乙醇的原料来源
1.1.4 世界燃料乙醇的技术进展
1.1.5 燃料乙醇与环境
1.2 运动发酵单胞菌Zymomonas mobilis
1.2.1 Zymomonas mobilis的介绍
1.2.2 菌种的遗传工程的改良
1.3 葡萄糖淀粉酶
1.3.1 葡萄糖淀粉酶简介
1.3.2 泡盛曲霉简介
1.4 纤维素酶
1.4.1 纤维素酶简介
1.4.2 纤维素酶的应用
1.4.3 纤维素酶的前景
1.4.4 瑞氏木酶内切葡聚糖酶
1.5 木薯
1.5.1 木薯的起源及分布
1.5.2 木薯的生物学特性
1.5.3 木薯的经济价值及用途
1.6 本课题的研究目的及研究内容
1.6.1 研究目的
1.6.2 研究意义
1.6.3 研究内容
1.7 本研究的技术路线
第二章:实验材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 菌株与质粒
2.1.2 主要试剂
2.1.3 培养基
2.1.4 酶活力测定试剂的配制
2.1.5 DNS(二硝基水杨酸)法测定酶活力所需试剂的配制
2.1.6 SDS-PAGE所需试剂的配制
2.1.7 木薯发酵所需试剂的配制
2.1.8 酒精含量测定所需试剂的配制
2.1.9 设备和仪器
2.2 实验方法与步骤
2.2.1 Z.mobilis的培养
2.2.2 基因操作
2.2.3 引物的设计与合成
2.2.4 PCR反应体系
2.2.5 酶切反应
2.2.6 DNA琼脂糖凝胶电泳及其DNA片段回收
2.2.7 连接反应体系
2.2.8 感受态的制备
2.2.9 转化
2.2.10 质粒的提取
2.2.11 粗酶夜的制备
2.2.12 DNS法测定还原糖
2.2.13 酶活力的测定
2.2.14 木薯粉发酵
2.2.15 发酵液中酒精的蒸馏
2.2.16 发酵后残渣中淀粉含量的测定
2.2.17 发酵液中酒精含量的测定
第三章:实验结果与讨论
3.1 基因的克隆
3.1.1 Z.mobilis ATCC31821 pdc启动子的克隆
3.1.2 信号肽的克隆
3.1.3 启动子和信号肽的串联
3.1.4 瑞氏木霉内切葡聚糖酶基因的克隆
3.1.5 启动子、信号肽和内切葡聚糖酶基因EGⅢ的克隆
3.1.6 泡盛曲霉葡萄糖淀粉酶基因的克隆
3.1.7 葡萄糖淀粉酶基因和终止子的克隆
3.2 表达载体的构建
3.2.1 表达载体的构建流程
3.2.2 表达载体的构建
3.3 内切葡聚糖酶基因和葡萄糖淀粉酶基因在运动发酵单胞菌中的表达
3.3.1 pBPSG,pBPSE,pBPSGE转化Z.mobilis ATCC31821及转化子的鉴定
3.3.2 Z.mobilis ATCC31821转化子表达蛋白SDS-PAGE电泳分析
3.4 酶活最适温度的测定
3.5 酶活最适pH的测定
3.6 酶活力的测定
3.7 木薯粉中淀粉的含量
3.8 木薯发酵酒精含量的测定
3.9 讨论
3.9.1 内切葡聚糖酶和葡萄糖淀粉酶的选择
3.9.2 表达载体的选择
3.9.3 菌株的选择
3.9.4 表达蛋白的酶活
3.9.5 重组Z.mobilis的发酵
3.9.6 本研究的后续工作
第四章:结论
参考文献
论文说明:缩略词
致谢