基因工程菌Pseudomonas sp. B4的构建及其产邻苯二酚发酵条件的初步研究

摘要

利用PCR技术以Pseudomonas sp.B3-1基因组DNA为模板,扩增出2.9kb编码苯甲酸双加氧酶基因簇benABC。将该基因簇连接于pLAFRJ载体,电转化至E.coliDH5α,再通过三亲本结合法导入野生菌株Pseudomonas sp.B3-1中,得到了一株邻苯二酚产量提高的基因工程菌,命名为Pseudomonas sp.B4,在相同发酵条件下,工程菌Pseudomonas sp.B4的邻苯二酚产量达到0.5mg/ml,比野生菌株Pseudomonas sp.B3-1提高了17.5%。对工程菌Pseudomonas sp.B4进行发酵条件优化表明,当苯甲酸钠浓度为6.0g/L,聚蛋白胨浓度为2.5g/L,温度为32℃以及pH值为6.0时,工程菌在200r/min旋转摇床发酵36小时后,邻苯二酚产量达到0.7mg/ml,比野生菌株Pseudomonas sp.B3-1提高了75%。