HFRS患者PBMC中αβT细胞TCR CDR3谱系漂移的监测及CDR3分子特征的分析

摘要

目的：初步分析肾综合征出血热（HFRS）患者外周血单个核细胞（PBMC）中TCRB链和TCRa链各家族CDR3谱系漂移的变化；分析患者克隆性增殖家族（溶解曲线单峰）CDR3的分子特征。
　　 方法：采取15例HFRS患者及4例健康志愿者的外周血，提取外周血单个核细胞（PBMC）中的总RNA，逆转录成cDNA，设计了26个人TRBV家族的特异性上游引物和一个共同的下游引物TRBC，34个人TRAV家族的特异性上游引物和一个共同的下游引物TRAC，荧光定量PCR（FQ-PCR）扩增26个人TRBV家族和34个人TRAV家族CDR3，溶解曲线法分析各TRBV和TRAV家族CDR3谱系的单、寡、多克隆增殖；并对β链和a链CDR3谱系中的克隆性增殖的家族进行扩增送测序，生物信息学分析克隆性增殖的TRBV和TRAV家族CDR3区的基因、氨基酸组成和特征。
　　 结果：（1）4例健康志愿者及15例HFRS患者PBMC中26个TRBV和34个TRAV家族CDR3的FQ-PCR产物在1.5％琼脂糖凝胶电泳上，多数家族CDR3在预测相应大小处显示一条模糊的条带，HFRS患者部分家族无条带；（2）4例健康志愿者PBMC中26个TRBV家族和34个TRAV家族的CDR3溶解曲线谱型为多克隆增生的分布；15例HFRS患者PBMC中26个TRBV家族和34个TRAV家族CDR3的溶解曲线谱型图上，多数家族为多克隆增生的分布，但部分出现数量不等的单峰、寡峰、表达极低的峰图，表现为不同的异常率[（单峰+寡峰+极低）/总的TRBV或TRAV家族]：（3）β链和a链单克隆性增殖家族的CDR3区有着不同的基因序列和氨基酸组成，不同患者的CDR3存在部分的共同基序。
　　 结论：HFRS患者PBMC中β链和a链各家族CDR3溶解曲线谱型图出现了单、寡、多克隆增殖家族，表现为不同的异常率；克隆性增殖的TRBV或TRAV家族有着不同的CDR3基因和氨基酸组成，但存在部分共同基序；提示HFRS患者外周血中存在克隆性增殖TRBV或TRAV家族的T细胞，为HFRS患者T细胞应答的研究提供了基础。

目录

文摘

英文文摘

英汉缩略词对照表

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述

参考文献

附录一：其余HFRS患者TCRβ链26个TRBV家族CDR3溶解曲线图

附录二：其余HFRS患者 TCRa链34个TRAV家族CDR3溶解曲线图

附录三：示例—TCRβ链CDR3区的测序结果及分析图

附录四：示例—TCRa链CDR3区的测序结果及分析图

致谢