依托咪酯后处理对大鼠脑缺血再灌注脑组织NAIP及caspase-3表达的影响

摘要

目的:观察依托咪酯后处理对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织NAIP及caspase-3表达的影响,为围手术期依托咪酯脑保护提供理论基础。
　　方法:采用夹闭双侧颈总动脉60min再灌注建立脑缺血再灌注模型,将60只SPF级SD健康雄性成年大鼠,6-8周龄,体重220-250g,随机分为四组(每组n=15只):假手术动物组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、依托咪酯乳剂后处理0.3mg/kg组(Etp1组)、依托咪酯乳剂后处理0.9mg/kg组(Etp2组),再按再灌注12h、24h、72h分三亚组(每组n=5只)。于再灌注前3min,I/R组经股静脉注射生理盐水1ml, Etp1、2组分别以相应依托咪酯乳剂剂量+生理盐水至1ml经股静脉注射。按再灌注后不同时间点取大鼠脑海马组织,常规石蜡包埋后切片。
　　①行HE染色观察海马CA1区神经组织病理学变化;
　　②免疫组化(immunohist ochemistry)染色法(S-P法)检测NAIP、active caspase-3蛋白表达及观察细胞凋亡情况。
　　结果:①各组大鼠脑海马CA1区神经组织病理学改变:Sham组各时间点神经细胞排列整齐、形态正常、数量较多,细胞核明显。与Sham组比较,I/R组海马CAl区细胞排列紊乱、间隙增宽,核固缩深染,核仁消失,随再灌注时间延长,损伤越重。与I/R组比较,Etp1、2组各时间点海马CAl区锥体细胞损伤明显减轻、神经细胞数量明显增多。
　　②各组大鼠脑海马CA1区神经组织NAIP的表达情况:Sham组各时间点极少有NAIP蛋白表达。与Sham组比较,I/R、Etp1、Etp2组NAIP蛋白表达明显增强(P<0.05), I/R组12h时表达最强,72h时仅少量NAIP蛋白表达。与I/R组比较,Etp1、2组各时间点海马 CA1区 NAIP表达显著增加,24h达高峰,72h时仍有较高 NAIP表达(P<0.05),但Eto1、2两组间无明显差异(P>0.05)。
　　③各组大鼠脑海马CA1区神经组织active caspase-3蛋白表达及细胞凋亡情况:Sham组各时间点偶见active caspase-3阳性细胞。与Sham组比较,I/R组海马CA1区 active caspase-3蛋白表达显著增强及阳性细胞数显著增多,细胞凋亡率显著升高(P<0.05),24h达高峰,72h开始减少。与I/R组比较,Etp1、2组各时间点海马CA1区active caspase-3蛋白表达明显减弱及阳性细胞数明显减少(P<0.05)、锥体细胞数明显增多,细胞凋亡率明显降低(P<0.05),但Etp1、2两组间无明显差异(P>0.05)。
　　结论:1.依托咪酯后处理能减轻大鼠脑缺血再灌注所致的神经细胞凋亡之损伤。
　　2.抗细胞凋亡机制可能与上调NAIP的蛋白表达,减少caspase-3的活化有关。

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1材料与方法

1.1主要试剂与药品

1.2主要溶液的配制

1.3主要器械和仪器设备

1.4实验动物

2.方法

2.1 动物分组

2.2 动物缺血模型的制备

2.3脑组织切片制作

2.4 检测指标

2．5 免疫组织化学染色指标阳性的判断标准

2.6 采集数据

3结果

3.1 脑组织病理学变化（HE染色，见附图2）

3．2脑组织NAIP的表达情况 （免疫组化染色法，见附图3）

3.3脑组织active caspase-3的表达情况（免疫组化染色法，见附图4）

4讨论

5 结论：

参考文献

综述

附图1 模型制备过程

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