hMLH1基因启动子CpG岛甲基化与胃癌关系的研究

摘要

目的：研究hMLH1基因启动子CpG岛甲基化与胃癌的关系。 方法：运用甲基化特异性PCR(MSP)检测了胃癌细胞BGC-823(低分化)、SGC-7901(中分化)、10例正常胃组织、31例胃癌组织、23例癌旁组织及53例癌前病变组织(33例慢性萎缩性胃炎，11例胃溃疡，9例胃息肉)中hMLH1基因启动子CpG岛甲基化状况。同时，运用RT-PCR检测了胃癌细胞BGC-823、SGC-7901及10例正常胃组织中hMLHl基因mRNA的表达状况。使用SPSS1.0.0统计软件进行统计学分析，显著性检验水准为α=0.05，P<0.05有统计学意义。 结果：①正常胃组织的MSP检测显示：hMLH1基因启动子CpG岛未被甲基化。②胃癌细胞BGC-823和SGC-7901的MSP检测显示：hMLH1基因启动子CpG岛均被甲基化。③正常胃组织的RT-PCR检测显示：hMLH1基因mRNA表达正常。④胃癌细胞BGC-823和SGC-7901的RT-PCR检测显示：hMLH1基因mRNA表达均缺失。⑤胃癌及癌旁组织的MSP检测显示：31例胃癌组织总的甲基化率为35.5﹪(11/31)，其中完全甲基化率为22.6﹪(7/31)，部分甲基化率为12.9﹪(4/31)，非甲基化率为64.5﹪(20/31)；23例癌旁组织甲基化率为30.4﹪(7/23)，非甲基化率为69.6﹪(16/23)；癌旁组织没有发现完全甲基化现象。⑥17例中/高分化腺癌中，甲基化率为29.4﹪(5/17)；14例低分化腺癌中，甲基化率为42.9﹪(6/14)。两组的甲基化率相比较，无显著性差异(x<'2>=0.606，P>0.05)。⑦53例癌前病变组织的MSP检测显示：33例慢性萎缩性胃炎甲基化率为15.2﹪(5/33)，非甲基化率为84.8﹪(28/33)；11例胃溃疡甲基化率为27.3﹪(3/11)，非甲基化率为72.7﹪(8/11)；9例胃息肉甲基化率为33.3﹪(3/9)，非甲基化率为66.7﹪(6/9)。总之，癌前病变总的甲基化率为20.8﹪(11/53)，总的非甲基化率为79.2﹪(42/53)；癌前病变组织也没有发现完全甲基化现象。⑧慢性萎缩性胃炎、肠化生、异型增生、腺瘤和胃癌，五种组织类型的甲基化率相比较，无显著性差异(x<'2>=5.32，p>0.05)。 结论：①正常胃组织的hMLH1基因启动子CpG岛未被甲基化且hMLH1基因mRNA表达正常。②胃癌细胞BGC-823和SGC-7901中hMLH1基因启动子CpG岛均被甲基化且hMLH1基因mRNA表达均缺失。表明hMLH1基因启动子CpG岛甲基化在hMLH1基因的表达调控过程中发挥关键作用，hMLH1基因启动子CpG岛甲基化可能是导致基因转录失活的重要原因之一，与胃癌癌变关联。③胃癌组织中hMLH1基因启动子CDG岛也存在甲基化的改变，表明hMLH1基因启动子CpG岛甲基化后基因失活导致错配修复功能缺陷或异常可能是胃癌发病的重要机制之一。④hMLH1基因启动子CpG岛甲基化与胃癌分化程度无关联。⑤癌旁组织以及癌前病变组织(慢性萎缩性胃炎、肠化生、异型增生、腺瘤)中hMLH1基因启动子Cp6岛均存在甲基化的改变。表明hMLH1基因启动子CpG岛甲基化可能是胃癌癌变过程中的早期分子事件。在胃炎→肠化生→异型增生→胃癌的不同阶段，hMLH1基因启动子CpC岛甲基化频率可能存在递增关系。⑥hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化可作为有发生胃癌风险的筛选指标。⑦MSP法是检测CpG岛甲基化状态的一种敏感、特异的方法。

目录

文摘

英文文摘

声明

前 言

一、DNA甲基化

二、哺乳动物DNA甲基化的特点

三、影响DNA甲基化的因素

四、DNA甲基化与肿瘤发生

五、DNA甲基化对基因表达的调控

六、hMLH1

第一部分胃癌细胞hMLH1基因启动子CpG岛甲基化

材料与方法

结果

第二部分胃癌细胞hMLH1基因mRNA的表达

材料与方法

结果

第三部分胃癌及癌旁组织hMLH1基因启动子CpG岛甲基化

材料与方法

结果

第四部分癌前病变组织hMLH1基因启动子CpG岛甲基化

材料与方法

结果

讨 论

参考文献

全文总结

缩略词

攻读学位期间发表论文

致 谢