外阴阴道念珠菌病患者阴道分离非白念珠菌的鉴定

摘要

外阴阴道念珠菌病(Vulvovaginal Candidiasis，VVC)是一种常见的由各种念珠菌感染引起的阴道炎。近年来，由于性传播疾病(STD)的发病率逐年增加，以及广谱抗生素、激素、阴道冲洗剂、免疫抑制剂的广泛应用，使VVC的发病率呈明显上升趋势。该病病因复杂，由于病原菌和机体双方面的多种因素，使其顽固难愈已成为临床医学的难点和研究的热点。揭示各种危险因素与VVC发病的关系，从而可对外阴阴道念珠菌病危险因素的特点有进一步地了解，为VVC的防治提供依据。尽管以往研究表明阴道念珠菌感染的病原体85％-90％为白念珠菌，但随着抗真菌药物的普遍应用，念珠菌的致病菌种及耐药性都发生了变化。除白念珠菌外，非白念珠菌的比例明显增长，尤其在复发性VVC和耐药菌株中占有很高比例。故本研究通过对外阴阴道念珠菌病患者阴道分离出的非白念珠菌进行菌种鉴定，以了解兰州地区女性阴道内非白念珠菌的感染情况，为临床实验室建立更加快速、准确的非白念珠菌感染的诊断和鉴定寻求方法。 目的：本研究通过对外阴阴道念珠菌病易感因素的分析以及对VVC患者临床分离的常见致病性非白念珠菌进行生物学分型、基因鉴定及限制性片段长度多态性分析(RFLP)，为临床上提供由非白念珠菌感染的外阴阴道念珠菌病的分子流行病学资料，提高临床诊断及防治水平。 方法：2007年1月～2007年12月，对兰州大学第一医院、兰州大学第二医院、省妇幼保健医院妇产科及皮肤科门诊就诊或常规白带检查的妇女进行问卷调查，将可疑患者(有典型症状如豆渣样白带和外阴瘙痒等)阴道后穹隆处的分泌物送检，真菌镜检发现菌丝或孢子，并培养鉴定为念珠菌阳性的患者确诊为阴道念珠菌感染病例组，对照组取自非VVC的体检者，详细询问一般情况，既往病史，既往用药史等情况。采用单因素分析和多因素Logistic回归分析外阴阴道念珠菌病的易感因素。拟诊为外阴阴道念珠菌病的患者，取阴道分泌物做15％KOH直接涂片镜检。对阳性标本行沙堡葡萄糖琼脂培养基分离培养，初步鉴定为念珠菌。然后采用芽管试验、厚壁孢子试验、CHROMagar显色培养基及API试纸条将分离自VVC患者阴道内的念珠菌菌株鉴定到种，其中常见致病性非白念珠菌采用真菌通用引物ITS1、ITS4对外阴阴道念珠菌病的病原菌rDNA的ITS区进行PCR扩增，从分子水平鉴定菌种。并选用MspⅠ、HaeⅢ两种内切酶对扩增产物进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析。 结果：1.单因素统计分析结果显示：病例组与对照组中使用抗生素、合并妊娠、合并性病、人工流产史、服用避孕药、穿紧身裤和偏好甜食这7种因素的差异具有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic分析结果显示：VVC的易感因素与妊娠、合并性病、服用避孕药、人工流产史、使用抗生素、穿紧身裤、偏好甜食密切相关(OR=7.818-78.897)。2.临床共分离出200株念珠菌，其中自念珠菌170株(85.0％)，光滑念珠菌15株(7.5％)，近平滑念珠菌7株(3.5％)、克柔念珠菌5株(2.5％)、热带念珠菌2株(1.0％)、乳酒念珠菌1株(0.5％)。3.通用引物ITS1、ITS4在白念珠菌、近平滑、热带、克柔念珠菌均扩增出一约550bp的条带；光滑念珠菌扩增出约900bp的条带。4.扩增产物经MspⅠ、HaeⅢ酶切后分别产生4种和2种特异性带型。 结论：1.使用抗生素、妊娠、合并性病、人工流产史、服用避孕药、穿紧身裤、偏好甜食为外阴阴道念珠菌病发病的主要易感因素，尤其以妊娠、合并性病、人工流产史最为显著。2.外阴阴道念珠菌病病原菌主要以白念珠菌为主，非白念珠菌中光滑念珠菌分离率最高。3.引物ITS1、ITS4可直接将光滑念珠菌与其它念珠菌区分开，从而帮助临床快速鉴定该菌成为可能。4.内切酶MspⅠ、HaeⅢ也可以特异地鉴定常见致病性非白念珠菌。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语中英文对照

声明

第一章前言

第二章外阴阴道念珠菌病的易感因素分析

第一节 材料与方法

第二节 结果

第三节 讨论

第三章外阴阴道念珠菌病病原菌种类分析及分子生物学鉴定

第一节 材料与方法

第二节 结果

第三节 讨论

第四章外阴阴道念珠菌病病原菌限制性片段长度多态性分析

第一节 材料与方法

第二节 结果

第三节 讨论

总结

参考文献

读研究生期间发表论文

致谢

附录：综述 阴道非白念珠菌鉴定及分型方法的研究进展