自拟宝肾方对糖尿病大鼠肾组织CTGF和MMP-9的影响

摘要

糖尿病肾病(Diabetic nephropathy，DN)是糖尿病严重的微血管并发症，是导致终末期肾病的重要原因。其发病机理尚未完全阐明，一般认为它与高血糖、多元醇.肌醇代谢异常、氧化应激、血流动力学障碍、凝血机制障碍、蛋白的非酶促糖基化等多种因素协同作用有关。糖尿病肾病重要的病理改变之一就是细胞外基质(Extracellular matrix，ECM)的堆积。转化生长因子-β1(Transformin growthfactorβ1，TGF-β1)和结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor，CTGF)目前已被公认为是包括糖尿病肾小球硬化在内的多种纤维化病变发病机制中的驱动因子，是抗纤维化治疗的有效靶点。研究证实，转化生长因子-β1可调节炎症反应，促进细胞外基质的合成和沉积，减少细胞外基质的降解，其过度表达可引起肾小球硬化和肾间质纤维化。结缔组织生长因子(CTGF)是TGF-β1的下游效应介质。研究发现CTGF不介导TGF-β1的抗增殖和抗炎作用，仅介导TGF-β1过度表达时促细胞外基质合成的作用。它可以通过自分泌与旁分泌的形式，刺激肾小球系膜细胞和其他肾脏固有细胞的增殖，促进细胞外基质的堆积，参与着肾小球肥大、肾小球硬化以及间质纤维化。 基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinase，MMPs)主要起到降解细胞外基质的作用。基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinase-9，MMP-9)又称明胶酶B，是MMPs家族的主要成员之一，其作用底物主要是IV、V、VII、X型胶原、明胶以及弹性纤维。MMP-9以酶原形式分泌，必须激活后才能降解胶原及其它基质蛋白。普遍认为是纤溶酶原在纤溶酶原激活物的作用下活化为纤溶酶，后者以级联放大的瀑布效应激活MMP-9而导致基质降解。 腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)可在短时间内建立糖尿病大鼠模型，并出现糖尿病肾脏损害。本文以此模型为基础，探讨糖尿病肾病早期结缔组织生长因子和基质金属蛋白酶-9的表达以及自拟中药宝肾方治疗糖尿病肾病的机制。 目的： 本研究以自拟中药宝肾方汤剂干预实验性糖尿病大鼠，应用免疫组化方法检测对照组(C组)、糖尿病组(D组)、糖尿病宝肾方治疗组(DB组)肾组织CTGF和MMP-9表达水平，并检测各组大鼠的生化指标，探讨自拟中药宝肾方汤剂保护肾脏的作用机理，为临床防治糖尿病肾病提供实验性理论依据。 方法： 将实验动物Wistar大鼠随机分为对照组(C组)、糖尿病组(D组)、糖尿病宝。肾方治疗组(DB组)。对照组大鼠腹腔注射枸橼酸缓冲液(假造模)，糖尿病组大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型，糖尿病宝肾方治疗组是在建立糖尿病模型基础上给予宝肾方汤剂灌胃。在实验8周后，各组大鼠留取血、尿以及肾脏标本，观察三组大鼠肾重(Weight of kidney)、体重(Bodyweight)、24小时尿蛋白(24hUpro)、血糖(Glu)、胆固醇(CHO)、尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)以及肾组织病理学变化；并通过免疫组织化学方法检测各组大鼠肾组织中CTGF和MMP-9的表达情况。 结果： 和对照组相比，糖尿病组肾组织CTGF蛋白表达明显升高[(0.234±0.009)vs(0.146±0.007)，P<0.01]，而MMP-9蛋白表达明显降低[(0.146±O.006)vs(0.236±0.007)，P<0.01]，肾脏肥大指数、24小时尿蛋白、血糖、胆固醇、尿素氮、血肌酐明显升高(P<0.01)；和糖尿病组相比，宝肾方治疗组肾组织CTGF蛋白表达降低[(0.194±0.008)vs(0.234±0.009)，P<0.01]，而MMP-9蛋白表达升高[(0.175±0.007)vs(0.146±0.006)，P<0.01]，肾脏肥大指数降低(P<0.05)，24小时尿蛋白、胆固醇、尿素氮、血肌酐也降低(P<0.01)。 结论： 自拟宝肾方对糖尿病大鼠肾脏具有保护作用，其机制可能与影响肾组织CTGF和MMP-9的表达有关。

目录

文摘

英文文摘

声明

前 言

材料和方法

结 果

讨 论

结 论

参考文献

硕士期间研究成果

致谢

附录：缩略词表