哺乳动物细胞有丝分裂中期染色体上RNA成分的研究

摘要

RNA和染色质之间的联系越来越紧密，这两个领域的交叉点也逐渐被揭示。相比有丝分裂其他时期的染色体形态，中期染色体是迄今可以得到的较大的完整的生物结构，最重要的一点在于其可见的X生物结构。但是到现在还没有关于中期染色体上RNA组成的相关研究，中期染色体由于其结构紧密一般认为是不转录的，那么其上是否存在RNA组分以及它们的组成如何是一个非常有趣的问题，所以这项研究对于中期染色体结构的组成以及表观遗传学都具有重要的指导意义和参考价值。本论文主要是从哺乳动物细胞中分离出完整的中期染色体，提取其上的RNA组分，检测其组成。另外已知一些小RNA分子可以介-异染色质装配以及基因沉默，所以是否在其组分中有一些小的RNA分子存在，它们可能参与中期染色体结构的形成或跟基因表达调控有关。本论文的结果主要有：提取出来的中期染色体RNA主要由核糖体28S，18S和5S亚基组成，同时在用15％的尿素-丙烯酰胺变性胶检测时发现在20-30bp之间有一条比较小的RNA条带出现；建立了中期染色体的提取，中期染色体荧光原位杂交技术，中期染色体RNA提取技术，以及3pmol的少起始量的小分子RNA的克隆等一系列相关技术，从而为下一步分析鉴定中期染色体上小RNA的组成及序列创造了良好的实验基础。

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文摘

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声明

第一章前言：染色质与RNA之间的相互联系

1.1染色体动力学

1.2 RNA的复杂性

1.3 RNA与染色质结构及基因表达紧密联系

1.3.1 RNA参与组蛋白乙酰化激活

1.3.2 RNA抑制组蛋白甲基化修饰

1.3.3 RNAi和异染色质

1.3.4 RNA与组蛋白变量-巨大H2A

1.3.5 miRNA和染色质

1.4小结

第二章相关技术

2.1 HT1080细胞培养

2.2中期染色体荧光原位杂交技术(FISH)

2.3基于蔗糖密度梯度离心的中期染色体提取技术

2.4中期染色体上RNA组分的提取技术

2.5少量小RNA分子的克隆技术

第三章哺乳动物中期染色体RNA组分的初步分析

3.1研究内容及研究目的

3.2材料

3.3方法

3.3.1 HT1080细胞中期染色体样品收集

3.3.2中期染色体RNA提取

3.3.3少量小RNA分子的克隆方法

3.4结果

第四章总结及展望

参考文献

致谢

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