抑制p38MAPK信号通路调控癫痫大鼠脑组织中EAAT2表达的研究

摘要

目的：
　　观察 EAAT2在氯化锂-匹鲁卡品点燃癫痫大鼠脑组织中的表达情况，明确p38MAPK抑制剂SB203580对EAAT2的表达有无影响。
　　方法：
　　健康成年雄性SD大鼠随机分为以下四个组：正常对照组（n=5）、癫痫组（0h、24h、3d、1W、2W五个时间点，n=5×4）、SB203580组（n=5）及溶剂对照组（n=5）。经腹腔依次注射氯化锂-匹鲁卡品建立癫痫实验动物模型，应用Racine评分标准评估各组大鼠发作程度及首次癫痫发作持续时间，HE染色观察各组大鼠海马区病理形态学改变；Western Blot、免疫组化以及免疫荧光检测EAAT2在各组大鼠脑组织中的表达情况。
　　结果：
　　1.行为学结果显示：腹腔注射匹鲁卡品后10min，癫痫组、溶剂对照组和SB203580组Racine评分依次为2.57±0.48、2.55±0.52和0.66±0.48），20min分别为：3.37±0.50、3.69±0.55和1.75±0.43），30min分别为：4.88±0.46、4.87±0.45和2.87±0.32。大鼠首次癫痫发作持续时间癫痫组为（62.56±9.22）s，溶剂对照组为（58.79±8.41）s，SB203580组为（28.35±4.00）s。各时间点Racine评分和首次癫痫发作持续时间在癫痫组和溶剂对照组中比较，差异无统计学意义（P＞0.05），同前两组比较，SB203580组首次癫痫发作持续时间明显缩短，并且Racine评分明显降低（P＜0.01）。
　　2.HE染色结果示：正常对照组大鼠海马组织结构清晰，细胞核大小规则，未见异常病理性改变。癫痫发作3d时，大鼠海马组织出现细胞核固缩以及大部分神经细胞坏死。
　　3.Western Blot检测EAAT2发现：正常对照组大鼠海马及颞叶新皮质中EAAT2有基础水平表达；癫痫发作后24h EAAT2的表达较正常对照组上调，3d时表达到顶峰（P＜0.05）；SB203580组，癫痫发作后第3d，EAAT2的表达较癫痫组（3d）显著升高（P＜0.05）；
　　4.免疫组化结果示：正常对照组海马EAAT2阳性细胞数为（12.60±3.44）个，癫痫组为（21.00±3.87）个，SB203580组为（33.42±9.52）个。与正常组比较，癫痫组海马中EAAT2阳性细胞数增多（P＜0.05）；与癫痫组的对比，SB203580组大鼠海马组织中EAAT2阳性细胞数明显增多（P＜0.05）。
　　5.免疫荧光对EAAT2在大鼠海马中的细胞定位发现，神经元和星形胶质细胞胞膜和胞浆中均有表达。
　　结论：
　　p38MAPK抑制剂SB203580可升高癫痫大鼠脑组织中EAAT2的表达，并可减轻大鼠的癫痫发作程度。

目录

声明

中英文缩略词表

前言

1 材料与方法

1.1 实验动物

1.2 主要实验试剂及器材

1.实验方法

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 SB203580对大鼠首次癫痫发作持续时间及Racine 评分的影响

2.2 HE染色观察正常及癫痫大鼠脑组织的病理学变化

2.3 Western blot 检测大鼠癫痫发作后脑组织中EAAT2的动态表达变化以及SB203580对其表达的影响

2.4 免疫组织化学检测 EAAT2在大鼠海马中的表达情况以及 SB203580对其表达的影响

2.5 免疫荧光三重标记检测EAAT2在海马中的细胞定位

3 讨论

结论

参考文献

综述:预防性抗癫痫药物治疗研究进展

致谢

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