抑制p38MAPK信号通路调控癫痫大鼠脑组织中腺苷A1受体及ENT1表达的研究

摘要

目的：
　　探索抑制p38MAPK信号通路后，癫痫大鼠的行为学和脑组织内腺苷A1受体及ENT1的表达变化。
　　方法：
　　健康成年雄性SD大鼠随机分为：正常对照组（n=5）、癫痫组（0h、24h、72h、1W、2W五个时间点，n=5×5）、SB203580组（n=5）及DMSO组（n=5）。建立氯化锂-匹鲁卡品癫痫大鼠模型，应用Racine评分标准观察各组大鼠首次癫痫发作潜伏期、1小时内癫痫发作次数；HE染色观察各组大鼠脑组织病理形态学改变；免疫组化、免疫荧光及Western blot检测腺苷A1受体在各组大鼠海马及颞叶新皮质中的表达情况；Western blot检测ENT1在各组大鼠海马中的表达情况。
　　结果：
　　1.行为学结果示：癫痫组的大鼠首次癫痫发作潜伏期为25.89±1.27min，DMSO组为25.65±1.56min，SB203580组为37.53±1.73min；癫痫组的1小时内大鼠癫痫发作次数为7.4±1.07，DMSO组为7.0±0.83，SB203580组为3.0±0.70。大鼠首次癫痫发作潜伏期和1小时内癫痫发作次数在癫痫组及DMSO组之间比较，差异无统计学意义（P>0.05）；与上述两组比较，SB203580组大鼠首次癫痫发作潜伏期明显延长，1小时内癫痫发作次数减少，且差异具有统计学意义（P<0.05）。
　　2.HE染色结果示：正常对照组海马组织结构清晰，未见病理性改变；癫痫组海马组织可见大量神经细胞凋亡、坏死；SB203580组海马组织亦有部分神经细胞变性坏死，但程度较癫痫组轻。
　　3.Western blot检测腺苷A1受体表达的结果示：正常对照组大鼠的海马及颞叶新皮质中腺苷A1受体有基础水平的表达；氯化锂-匹鲁卡品癫痫模型大鼠中，腺苷A1受体在癫痫造模成功后24h表达较正常对照组上调，72h表达达到高峰，与正常对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）；在应用p38MAPK抑制剂SB203580干预后，癫痫造模后第72h，SB203580组大鼠腺苷A1受体的表达较癫痫组（72h）显著下调，差异具有统计学意义（P<0.05）；免疫组化检测腺苷A1受体表达的结果示：正常对照组大鼠海马组织腺苷A1受体阳性细胞数为5.33±1.45，癫痫组为25.33±3.18，SB203580组为12.33±1.45。与正常对照组相比，癫痫组腺苷A1受体的阳性细胞数明显增多，且着色增强，差异具有统计学意义（P<0.05）；与癫痫组相比， SB203580组的腺苷A1受体阳性细胞数减少，且着色较浅，差异具有统计学意义（P<0.05）。免疫荧光检测腺苷A1受体表达的结果示：腺苷A1受体主要表达于神经元的胞膜及胞质中。
　　4.Western blot检测ENT1表达的结果示：SB203580组（24h）大鼠海马组织中ENT1的表达较癫痫组（24h）显著下调，差异具有统计学意义（P<0.05）。
　　结论：
　　p38MAPK抑制剂SB203580可减轻大鼠海马神经元病理损害，延长大鼠首次癫痫发作潜伏期和降低大鼠癫痫发作程度,并同时降低腺苷A1受体和ENT1的表达。

目录

声明

中英文缩略词表

前言

1 材料与方法

1.1 实验动物

1.2 主要实验试剂及器材

1.3 实验方法

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 SB203580对大鼠首次癫痫发作潜伏期及发作次数的影响

2.2 Western blot 检测腺苷A1受体在各组癫痫动物模型海马及颞叶新皮质中的表达情况

2.3 HE染色观察正常及癫痫大鼠脑组织的病理学变化

2.4 免疫组织化学检测腺苷A1受体在海马及邻近海马的颞叶皮质的表达部位

2.5 免疫荧光多重标记显示腺苷A1受体在海马及邻近海马的颞叶皮质中的定位

2.6 Western blot 检测在各组癫痫动物模型海马中ENT1的表达情况

3 讨论

4 结论

参考文献

综述:长程视频脑电监测在癫痫与非痫性发作性疾病中应用的研究进展

致谢

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