利多卡因-肾上腺素复方凝胶研制及其经皮渗透能力研究

摘要

目的：利多卡因透皮制剂单独使用在起效时间、麻醉深度和持续时间方面具有局限性，而且无加入肾上腺素后收缩血管以减少出血的作用。本研究旨在研制利多卡因-肾上腺素复方凝胶（Lidocaine-epinephrine compound gel。L-EG），并且研究其经皮渗透能力。
　　方法：⑴采用正交设计助手ⅡV3.1进行正交试验设计，分别以氮酮、丙二醇、利多卡因和肾上腺素作为考察因素，每个因素3个水平，制定L-EG的处方、利多卡因凝胶（Lidocaine gel。LG）的处方和肾上腺素凝胶（Epinephrine gel。EG）的处方。根据3个正交表L9(34)，得到每种凝胶的9组处方，制备凝胶。⑵采用改良的Franz扩散池进行大鼠离体皮肤渗透试验，用高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography。HPLC）测定每种凝胶的9组处方，分别计算出在涂药后的30分钟、60分钟、120分钟、180分钟和240分钟的药物累积渗透量，以涂药后240分钟的药物累积渗透量和皮肤滞留量的综合评分作为考察指标，筛选和优化最佳处方的组分。制备最佳处方的L-EG，LG和EG。⑶健康大鼠，雌雄不拘，体重190g-230g，饲养24小时。随机分为三组：L-EG组、LG组和EG组，每组各20只。⑷在大鼠腹部剃毛区域画两个直径分别为2.0cm和4.0cm的同心圆。直径为2.0cm的内圆为涂药皮肤，直径为4.0cm的同心圆减去直径为2.0cm的外环为涂药周围皮肤。称取L-EG、LG和EG各1.0g，分别均匀涂抹于内圆皮肤表面。涂药后30分钟、60分钟、120分钟、180分钟和240分钟，生理盐水冲净凝胶，切取涂药皮肤和涂药周围皮肤分别匀浆；另外在涂药后上述时间点大鼠心脏采血。采用HPLC测定皮肤组织和血浆中利多卡因和肾上腺素的浓度。⑸同4操作，分别在上述时间点，肉眼观察涂药皮肤和涂药周围皮肤有无变白、潮红等后，切取涂药皮肤置于甲醛溶液固定，行常规HE染色后，在光镜下观察血管是否扩张充血。⑹正交设计助手ⅡV3.1进行正交试验设计的数据分析。皮肤组织和血浆中药物含量用x±s表示。两组间比较采用统计学软件SPSS19.0的单因素方差分析和LSD检验进行统计学处理（n=3），P<0.05为差异有显著性。
　　结果：①L-EG的最佳处方为3％氮酮、10%丙二醇、20%利多卡因、0.2%肾上腺素；LG的最佳处方为3%氮酮、10%丙二醇、20%利多卡因。EG的最佳处方为3%氮酮、10%丙二醇、0.2%肾上腺素。②L-E G组和LG组在涂药皮肤的利多卡因含量均呈时间依赖性增加。L-E G组涂药皮肤的利多卡因含量高于LG组（P<0.05）。涂药60分钟时，LG组和 L-EG组涂药周围皮肤中利多卡因才能测出，LG组的利多卡因含量呈时间依赖性增加，而 L-EG组在60分钟时达峰值，以后逐渐下降。60分钟时两组凝胶的利多卡因含量无差异（P>0.05），L-EG组在120分钟、180分钟和240分钟时低于LG组（P<0.05）。③EG组和L-EG组在涂药皮肤中肾上腺素含量在60分钟时达到峰值，以后逐渐下降。L-EG组在30分钟、60分钟和120分钟时低于EG组（P<0.05），在180分钟和240分钟时高于EG组（P<0.05）。EG组和L-EG组涂药周围皮肤中肾上腺素的含量逐渐增加，120分钟时达峰值，以后逐渐下降。30分钟时，L-EG组和EG组无差异（P>0.05），60分钟和120分钟时 L-EG组低于EG组（P<0.05），180分钟和240分钟时高于EG组（P<0.05）。④涂布LG、E G和L-E G后各时间点血浆中均未检测到利多卡因和肾上腺素。⑤与正常皮肤比较，肉眼观察L-EG组和EG组涂药皮肤逐渐变白：30分钟和60分钟时涂药皮肤变白区域逐渐增大，但120分钟后逐渐减小；涂药周围皮肤60分钟和120分钟时皮肤变白区域逐渐增大，而180分钟和240分钟时逐渐变小。EG组240分钟时，涂药皮肤和涂药周围皮肤轻微潮红；L-EG组180分钟后涂药皮肤出现潮红。LG组涂药皮肤及涂药周围皮肤在各时间点均未见皮肤变白；仅在涂药120分钟后，涂药皮肤出现轻微潮红。⑥与正常皮肤比较，光镜下观察 L-EG组和 LG组在涂药后30分钟和60分钟涂药皮肤均未见血管扩张充血，在涂药120分钟后可见血管明显扩张充血，180分钟后可见角质层萎缩变薄；EG组30分钟、60分钟和120分钟时涂药皮肤均未见血管扩张充血，180分钟后见血管轻度扩张充血，240分钟时可见角质层局部区域轻度萎缩变薄。
　　结论：⑴L-EG、LG和EG中的利多卡因和肾上腺素均可经皮吸收。⑵L-EG中的肾上腺素的缩血管效应可提高利多卡因在局部皮肤组织的含量，且可减少出血。⑶L-EG起效快，可起到临床注射两种药物的类似效果，为进一步的临床研究提供坚实的实验依据。

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前言

材料和方法

1 .1 材料

1 .1.1 仪器

1 .1.2 药品和试剂

1 .1.3 试剂配制

1 .1.4 实验动物

1 .2 方法

1 .2.1 透皮试验分析方法的建立

1 .2.2 凝胶制备

1 .2.3 体外透皮渗透实验

1 .2.4 在体透皮渗透实验

1 .2.5 统计学处理

结果

1 .1 精密度试验结果

1 .2 回收率试验结果

1 .3 系统适应性试验

1 .4正交试验设计结果

1 .4.1 L-EG正交试验结果

1 .4.2 LG正交试验结果

1 .4.3 EG正交试验结果

1 .5 在体皮肤组织中药物的滞留量

1 .5.1 LG组和L-EG组利多卡因在体皮肤的滞留量

1 .5.2 EG组和L-EG组肾上腺素在体皮肤的滞留量

1 .6 在体透皮渗透实验中血浆药物含量

1 .7 外用L-EG、LG和EG后皮肤颜色变化

1 .8 外用L-EG、LG和EG后组织学观察

讨论

小结

参考文献

英语缩略词

在学期间的研究成果

致谢