蕨麻多糖对镉致免疫抑制小鼠的免疫调节机理研究

摘要

目的：探索蕨麻多糖（PAP）对镉（Cd）致免疫抑制小鼠的免疫调节作用及其可能的作用机制，为临床应用PAP防治镉毒性提供实验依据。
　　方法：
　　1.提取甘肃天祝产秋蕨麻中PAP，并进行定量和定性鉴别。
　　2.清洁级昆明种雄性小鼠70只，适应性喂养两周后，尾静脉注射Cd染毒液1.2mg/kg/d，连续14d，经流式细胞术测脾T细胞亚群确定造模成功后，随机分为空白对照组、模型组、环孢菌素A（CsA）组、PAP预治疗组、PAP低、中、高剂量组，每组10只。模型组：尾静脉注射Cd染毒液1.2mg/kg/d，连续14d。PAP预治疗组：腹腔注射PAP100mg/kg，隔日1次，连续注射4次后（末次注射后第2d）同模型组注射镉染毒液14d；PAP低、中、高剂量组：同模型组注射Cd染毒液14d后，分别腹腔注射PAP溶液50、100、200mg/kg，隔天注射1次，连续4次。空白对照组、CsA组分别尾静脉注射等体积生理盐水0.2mL/d·只和CsA溶液1.5mg/kg/d·只，连续注射14d。各组均于末次注射4h后腹腔注射6％淀粉肉汤（1ml），每日1次，连续3d，处死前30min腹腔注射5%鸡红细胞。30min后，眼球取血并分离血清，取腹腔液约5mL；断颈处死后取胸腺、脾脏称重，取结肠与胸腺、脾脏固定于4%甲醛溶液待检。HE染色法观察小鼠胸腺、脾脏、结肠组织病理变化；间接免疫荧光法计数胸腺T淋巴细胞荧光阳性百分率；流式细胞法测脾T淋巴细胞CD4+%、CD8+%、CD4+/CD8+比值；ELISA法测血清IL-2、IL-10、IFN-γ含量；光学显微镜观察腹腔巨噬细胞吞噬功能的变化。
　　结果：
　　1.天祝产秋蕨麻PAP含量约2.03%，其主要单糖组分是葡萄糖和阿拉伯糖。
　　2.模型组、CsA组与空白对照组比较，脾脏、胸腺指数及脾脏T淋巴细胞CD4+%明显下降，CD8+%明显升高，差异均有统计学意义（P<0.05），胸腺、脾脏、结肠组织均有免疫细胞损伤，胸腺T细胞CD4+荧光阳性百分率、血清IL-2、IFN-γ含量、巨噬细胞吞噬功能均明显下降，差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01），胸腺T细胞CD8+荧光阳性百分率、血清IL-10含量均明显升高，差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。
　　3.模型组与CsA组比较上述差异无统计学意义（P≥0.05）。
　　4.PAP预治疗组、PAP中、高剂量组与模型组、CsA组相比，脾脏及结肠组织病理接近正常，胸腺组织恢复不明显，胸腺T细胞CD4+荧光阳性百分率、脾T淋巴细胞CD4+%、血清IL-2、IFN-γ含量、腹腔巨噬细胞吞噬功能明显升高（P<0.05或P<0.01）；胸腺T细胞CD8+荧光阳性百分率、脾T淋巴细胞CD8+%、血清IL-10含量明显下降（P<0.05或P<0.01)，但PAP低剂量组上述差异无统计学意义（P≥0.05）。PAP预治疗组与PAP中剂量组比较，上述差异无统计学意义（P≥0.05），PAP高剂量组与预治疗组相比，差异有统计学意义（P<0.05）。
　　结论：
　　1.天祝产秋蕨蔴中PAP含量在2%以上，其单糖组分主要是葡萄糖和阿拉伯糖。
　　2.PAP能增强镉抑制小鼠的细胞免疫功能，其机制与保护小鼠免疫器官、增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能和调节小鼠T细胞诱导分化的关键细胞因子IL-2、IFN-γ和IL-10的合成水平有关，且作用与PAP浓度呈正相关。