硒、β-胡萝卜素对大鼠生理功能影响及防治肝癌的研究

摘要

目的：
　　在建立Wistar大鼠移植性肝细胞癌模型前（预防性）、后（治疗性）单独/联合给予硒、β-胡萝卜素。观察二者对大鼠生理功能作用及影响肝癌发生、发展的影响作用，以期为防治肝癌提供新思路。
　　方法：
　　1、预防性阶段：在建立Wistar大鼠移植性肝细胞癌模型前，单独/联合每日定时根据体重给予硒、β-胡萝卜素4周：硒实验组（亚硒酸钠0.3mg/(kg·d)），β-胡萝卜素实验组（β-胡萝卜素10mg/(kg·d)），硒联合β-胡萝卜素实验组（亚硒酸钠0.3mg/(kg·d)+β-胡萝素10mg/(kg·d)），对照组（水0.3mg/(kg·d)+油10mg/(kg·d)）。期间观察大鼠一般体征，每日记录摄食量，每48h称量记录体重，计算食物利用率。实验第30天，各组处死10只大鼠，采血，检测血生化、血清及肝组织抗氧化指标（T-SOD、GSH-Px、MDA）；计算脏器系数；制备大鼠肝脏HE染色病理切片，观察肝脏病理结构变化。
　　2、剩余56只大鼠（14×4组）开腹建立Wistar大鼠Walker-256移植性肝细胞癌模型，观察大鼠行为体征一周。
　　3、建模后第八天，各实验组继续给予相应受试物。干预至有大鼠出现死亡时，处死全部大鼠，采血，检测血常规、血生化、血清及肝组织抗氧化指标（T-SOD、GSH-Px、MDA）；计算脏器系数；制备大鼠肝脏HE染色病理切片，观察肝脏病理结构变化。并使用Western Blot检测肝脏组织Bcl-2、Bax蛋白表达情况。
　　结果：
　　1、预防性阶段
　　1.1、大鼠一般体征
　　在预防性阶段，各组大鼠毛发正常，眼耳口鼻无异常分泌物，精神佳，行为活动正常。
　　1.2、体重、摄食量及食物利用率情况
　　预防性阶段，各组大鼠体重均保持逐渐趋缓的增长。雌鼠第二周体重增长量Se组小于联合组和对照组(P<0.01)。各组大鼠同实验节点摄食量和食物利用率差异无统计学意义。
　　1.3、脏器系数
　　雄鼠：肝脏脏器系数Se组大于β-C组(P<0.05)，脾脏脏器系数Se组大于β-C组和联合组(P<0.01)；雌鼠：肺脏脏器系数联合组大于对照组(P<0.05)，卵巢脏器系数Se组大于联合组(P<0.05)。
　　1.4、血生化相关指标
　　直接胆红素与间接胆红素的比值：β-C组小于对照组(P<0.05)，β-C组小于Se组和联合组(P<0.01)；球蛋白的值：β-C组和联合组均大于对照组(P<0.05)；BUN的值：联合组小于β-C组(P<0.05)；各组大鼠血糖血脂代谢指标差异无统计学意义。
　　1.5、血清及肝组织抗氧化指标
　　1.5.1、血清抗氧化指标
　　各组大鼠血清抗氧化指标差异无统计学意义。
　　1.5.2、肝组织抗氧化指标
　　组织T-SOD活力：Se组和联合组小于对照组(P<0.01)，β-C组大于对照组(P<0.05)，Se组小于联合组和β-C组，β-C组大于联合组(P<0.01)；组织GSH-Px活力：Se组和联合组小于对照组(P<0.01)，β-C组大于对照组(P<0.01)，Se组和联合组小于β-C组(P<0.01)；组织MDA含量：各组数据差异无统计学意义。
　　1.6、病理学变化
　　预防性阶段各组大鼠肝组织结构正常。
　　2、移植性肝细胞癌模型建立
　　接种大鼠均出现不同程度的精神萎靡、毛发蓬乱暗淡、进食量及体重减少等情况。每组抽取2只大鼠处死后解剖，均于肝脏附近发现肉眼可见瘤结节，移植性肝细胞癌大鼠模型建立成功。
　　3、治疗性干预阶段
　　3.1、大鼠一般体征
　　大鼠基本情况同上，个别大鼠出现口鼻血样分泌物、腹部膨胀肿大、行动不便等情况。
　　3.2、体重、摄食量及食物利用率
　　体重：雄鼠体重：第一周，β-C组和联合组大于对照组(P<0.01)；第三周，Se组和β-C组大于对照组(P<0.05)；第四周，Se组大于对照组和联合组(P<0.05)；接种前后，β-C组体重减少量大于Se组、联合组和对照组。雌鼠体重：接种前后Se组体重减少量大于对照组(P<0.05)。
　　进食量：接种雌鼠接种前Se组摄食量大于对照组和联合组(P<0.05)。
　　食物利用率：接种大鼠食物利用率差异无统计学意义。
　　3.3、脏器系数
　　雄鼠脏器系数：脾脏脏器系数β-C组小于联合组(P<0.05)。雌鼠脏器系数：肺脏脏器系数，联合组大于Se组、β-C组和对照组(P<0.01)，Se组小于对照组(P<0.05)；肝脏脏器系数，Se组和β-C组小于对照组(P<0.05)，Se组和β-C组小于联合组(P<0.05)；脾脏脏器系数，Se组小于β-C组(P<0.05)；右肾脏器系数，Se组和联合组小于对照组(P<0.05)。
　　3.4、血常规和血生化
　　3.4.1、血常规相关指标
　　大型血小板比率：联合组大于对照组(P<0.05)，Se组小于联合组(P<0.05)；白细胞相关指标：各组数据差异无统计学意义。
　　3.4.2、血生化相关指标
　　TP的值：Se组小于对照组(P<0.01)，Se组小于β-C组和联合组(P<0.05)；GLO的值：Se组小于对照组(P<0.01)，Se组小于β-C组和联合组(P<0.05)；BUN的值：Se组大于β-C组(P<0.05)；各组血糖血脂代谢指标差异无统计学意义。
　　3.5、血清及肝组织抗氧化指标
　　3.5.1、血清抗氧化指标
　　各组大鼠血清抗氧化指标（T-SOD、GSH-Px、MDA）差异无统计学意义。
　　3.5.2、肝组织抗氧化指标
　　组织T-SOD活力：Se组大于对照组(P<0.01)，联合组大于对照组(P<0.05)，β-C组大于Se组(P<0.01)、对照组(P<0.01)和联合组(P<0.05)；组织GSH-Px活力：Se组、β-C组、联合组均大于对照组(P<0.01)，联合组大于Se组和β-C组(P<0.01)；组织MDA含量：Se组大于对照组、β-C组和联合组(P<0.01)，β-C组大于对照组(P<0.01)和联合组(P<0.05)。
　　3.6、病理学变化
　　接种后大鼠肝脏出现病理性结构损伤。
　　3.7、肝组织蛋白表达情况
　　Bcl-2蛋白表达：Se组大于对照组(P<0.05)和联合组(P<0.01)，联合组小于对照组(P<0.05)和β-C组(P<0.01)。Bax蛋白表达：β-C组和联合组大于Se组(P<0.05)。
　　Bcl-2/Bax比值：联合组小于对照组、Se组和β-C组(P<0.01)，β-C组和联合组小于对照组(P<0.01)，Se组大于对照组、联合组和β-C组(P<0.01)。
　　结论：
　　1.预防性阶段，各组大鼠生长发育良好，硒、β-胡萝卜素摄入对大鼠正常生长发育不会造成不良影响，亦不对大鼠造成有害刺激或氧化损伤，且β-胡萝卜素实验组可以提高大鼠肝脏的抗氧化水平。
　　2.本实验通过开腹建立Wistar大鼠Walker-256移植性肝细胞癌模型是可行的。建立移植性肝细胞癌模型后，大鼠受到肿瘤细胞的侵袭作用，机体出现一系列病症反应，相应的诸多机体功能亦出现紊乱变化。
　　3.预防和治疗性给予大鼠适量的硒、β-胡萝卜素可提高机体的抗氧化能力，二者联合可以降低肝脏组织Bcl-2蛋白的表达，提高Bax蛋白的表达，促进肿瘤细胞的凋亡，有利于防治肝癌的发生、发展。提示硒、β-胡萝卜素联合应用在肝细胞癌的防治方面有积极的作用，作为一种新思路，有进一步继续研究的价值及意义。
　　4.硒影响机体生理功能及防治肝癌方面表现出双向的生物调节作用，其安全剂量、应用途径有待进一步探讨。

目录

声明

缩略词表

第一章 研究背景

1.1 原发性肝癌及防治策略概述

1.2 硒、β-胡萝卜素等食物活性物质与防治肝癌的研究概述

1.3 硒、β-胡萝卜素联合作用对肿瘤防治的应用及研究情况

1.4 本研究的思路及目的意义

第二章 本研究方案框架及技术路线图

2.1 本研究方案框架

2.2 本研究技术路线图

第三章 预防性硒、β-胡萝卜素摄入对大鼠的影响

3.1 材料与方法

3.2 结果

3.3 讨论

3.4 小结

第四章 移植性肝细胞癌大鼠模型建立

4.1 材料

4.2 实验方法

4.3 结果

4.4 讨论

4.5 小结

第五章 治疗性硒、β-胡萝卜素摄入对大鼠全身及肝脏影响

5.1 材料

5.2 方法

5.3 结果

5.4 讨论

5.5 小结

第六章 结论

不足及展望

一、不足

二、展望

参考文献

在学期间的研究成果

致谢