青霉T24-2是一株具有较高固态发酵产酶能力的菌株。本文通过对青霉T24-2的固态发酵条件进行研究，确定了该菌株的最佳产酶条件为:固体培养基蔗麸比为4∶6，添加0.2％尿素为氮源，按10％接种量接种种龄为18h的菌悬液，每250mL三角瓶中固体培养基装瓶量30g（干重10g），pH自然，30℃下培养3d。最佳糖化条件为:曲料比1∶3，加水比1∶6，在50℃，170r/min条件下糖化18h，最高糖化率可达32.4％，每100g甘蔗渣糖化液经酿酒酵母发酵后，酒精产量可达11.3g。 甘蔗渣经4％二甲基亚砜预处理后，制曲并糖化，CMCase和FPA酶活分别可达219.38U/g和16.07U/g，糖化率为21.92％。 采用酸碱分批不浸泡的预处理方式，CMCase和FPA酶活分别达到222.3U/g和16.77U/g，糖化率可达23.34％，能够满足后期糖化液发酵产酒精的要求。 青霉T24-2粗酶液依次经苯基疏水柱(Phenyl 6 Fast Flow)与凝胶柱（Sephadex G-200）分离纯化得到内切-β-1，4-葡聚糖酶;经丁基疏水柱(Butyl4FastFlow)与离子交换柱(DEAE-Sepharose Fast Flow)分离纯化得到β-葡萄糖苷酶;经离子交换柱(DEAE-Sepharose Fast Flow)单柱纯化得到木聚糖酶。上述三种组分经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，分子量分别为40kD，55kD和20kD。其中，内切-β-1，4-葡聚糖酶纯化了3.15倍，比活力由2.06U/mg提高到6.48U/mg;β-葡萄糖苷酶纯化了3.67倍，比活力由0.33U/mg提高到1.21U/mg;木聚糖酶纯化了3.72倍，比活力由1.54U/mg提高到5.74U/mg。 内切-β-1，4-葡聚糖酶和木聚糖酶的最适反应pH为6.5，β-葡萄糖苷酶的最适反应pH为5.0，上述三种组分的最适反应温度均为50℃。内切-β-1，4-葡聚糖酶和木聚糖酶分别在pH5.5和pH6.0时较为稳定，而β-葡萄糖苷酶在pH5.0时稳定性最高。40℃甚至更高的温度会严重影响上述三种酶组分的稳定性，对其保藏是极为不利的。
展开▼
