调控内源性大麻素系统对不同脑胶质瘤细胞的影响研究

摘要

研究背景:脑胶质瘤是恶性度很高、易复发、预后差的颅内恶性肿瘤之一，在临床上一直是个难题。许多研究证明内源性大麻素具有抗肿瘤生成作用，包括抑制增殖、诱导凋亡和抑制迁移作用，但其对胶质瘤的作用靶点及详细机制尚未完全阐明。雷公藤红素可以抑制蛋白酶体活性、阻滞在细胞周期和诱导细胞凋亡，这使得它成为一种潜在的治疗胶质瘤的药物。
　　目的:本研究通过观察利用单独分子生物学、分子药物学手段调控内源性大麻素系统或与雷公藤红素联用后不同胶质瘤细胞的增殖情况，在细胞水平探讨胶质瘤可能的治疗靶点，为雷公藤红素开发成为抗胶质瘤新药提供依据。
　　方法:用细胞计数板计算细胞数绘制细胞的生长曲线，根据曲线计算出倍增时间;用Westernblot方法检测细胞内CD133表达;内源性大麻素、游离脂肪酸及神经酰胺采用LC-MS/MS方法检测;使用荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测大麻素受体CB1、CB2，大麻素水解酶FAAH、MGL等的基因mRNA表达水平及雷公藤红素对其的影响;用CCK-8试剂盒检测单独调控内源性大麻素系统或与雷公藤红素联用后胶质瘤细胞增殖的影响。
　　结果:SHG细胞增长速度最快，具有干细胞特征。四种细胞内FFAs、Ceramides含量均有显著性差异。内源性大麻素系统中大麻素AEA、2-AG及其水解酶FAAH、MGL，以及CB1的表达有显著性差异，2-AG和MGL是调控内源性大麻素系统的重要靶点。雷公藤红素对胶质瘤细胞具有一定程度的抑制作用，存在时间和剂量依赖性，在此过程中上调了大麻素受体的基因表达，CB2的升高更为明显，雷公藤红素与2-AG分解酶抑制剂JZL184、小剂量的大麻素受体激动剂都可以增强的抗胶质瘤作用，可以作为抗胶质瘤作用的联合用药开发。
　　结论:上调内源性大麻素2-AG含量或激活相关信号通道会抑制胶质瘤细胞的增殖，内源性大麻素系统是治疗胶质瘤的有效靶点，雷公藤红素作为抗胶质瘤联合用药开发具有良好的临床应用前景。

目录

声明

摘要

第一章 前言

1．1 胶质瘤概述

1．1．1 胶质瘤简介

1．1．2 胶质瘤治疗手段

1．1．3 胶质瘤细胞系概况

1．2 内源性大麻素系统概述

1．2．1 内源性大麻素简介

1．2．2 内源性大麻素降解途径

1．2．3 内源性大麻素系统与肿瘤

1．3 雷公藤红素概述

1．3．1 雷公藤红素简介

1．3．2 雷公藤与脑胶质瘤

1．4 液相色谱-二级质谱联用分析技术

1．5 立题依据

参考文献

第二章 四种人脑胶质瘤细胞系的比较研究

2．1 四种脑胶质瘤细胞系的生长曲线比较

2．1．1 仪器和试剂

2．1．2 实验方法

2．1．3 实验结果和讨论

2．2 四种脑胶质瘤细胞系的CD133表达差异比较

2．2．1 仪器和试剂

2．2．2 实验方法

2．2．3 实验结果和讨论

2．3 四种脑胶质瘤细胞系的游离脂肪酸(FEAs)与神经酰胺(CRE)表达差异比较

2．3．1 仪器和试剂

2．3．2 实验方法

2．3．3 实验结果和讨论

2．4 本章小结

参考文献

第三章 内源性大麻素系统在四种人脑胶质瘤细胞系中的表达规律研究

3．1 内源性大麻素水平在四种脑胶质瘤细胞系中的比较

3．1．1 仪器和试剂

3．1．2 实验方法

3．1．3 实验结果和讨论

3．2 大麻素受体和分解酶在四种脑胶质瘤细胞系中的比较

3．2．1 仪器和试剂

3．2．2 实验方法

3．2．3 实验结果和讨论

3．3 本章小结

参考文献

第四章 雷公藤红素对人脑胶质瘤细胞及其内源性大麻素系统的影响

4．1 雷公藤红素对人脑胶质瘤细胞增殖的影响

4．1．1 仪器和试剂

4．1．2 实验方法

4．1．3 实验结果和讨论

4．2 雷公藤红素对人脑胶质瘤细胞中大麻素受体的影响

4．2．1 仪器和试剂

4．2．2 实验方法

4．2．3 实验结果和讨论

4．3 雷公藤红素对人脑胶质瘤细胞中内源性大麻素及神经酰胺水平的影响

4．3．1 仪器和试剂

4．3．2 实验方法

4．3．3 实验结果和讨论

4．4 本章小结

参考文献

第五章 雷公藤红素协同调控内源性大麻素系统对人脑胶质瘤细胞的影响

5．1 仪器和试剂

5．2 实验方法

5．2．1 细胞培养

5．2．2 细胞毒性实验

5．3 实验结果和讨论

5．3．1 内源性大麻素分解酶抑制剂JZL184单独及与雷公藤红素联用对四种脑胶质瘤细胞增殖的影响

5．3．2 大麻素受体拮抗剂AM251、SR141716、SR144528单独及与雷公藤红素联用对四种脑胶质瘤细胞增殖的影响

5．3．3 辣椒素受体拮抗剂Capsazepine单独及与雷公藤红素联用对四种脑胶质瘤细胞增殖的影响

5．3．4 大麻素受体激动剂WIN 55，212-2单独及与雷公藤红素联用对四种脑胶质瘤细胞增殖的影响

5．3．5 大麻素受体激动剂与拮抗剂联用对四种脑胶质瘤细胞增殖的影响

5．4 本章小结

参考文献

第六章 结论

缩略语表

致谢

附录