蛋白激酶p38α和蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2在雌性生殖过程的作用研究

摘要

本文主要从以下两部分进行了论述：
　　第一部分 p38α在小鼠植入过程中的作用机制研究
　　在哺乳动物中，成功的植入是实现胚胎正常发育的关键前提，植入的顺利进行需要两个先决条件:获得植入能力的囊胚和处于接收态的子宫。对小鼠来说，植入过程又分为三个阶段:胚胎的定位、粘附和侵入。目前越来越多的研究表明，及时而顺利的植入过程决定了以后胚胎发育的命运，植入的延迟有可能导致胚胎发育的异常甚至可引发妊娠的失败。在我们的工作中，利用PRcre工具鼠和p38αloxp/loxp小鼠，我们特异性的在小鼠子宫中敲除了p38α。实验中我们发现p38α敲除小鼠由于植入发生延迟，导致小鼠胚胎发育异常并最终导致小鼠不育，人工诱导蜕膜化实验发现敲除p38α以后，小鼠子宫的蜕膜过程发生缺陷。进一步分析发现，p38α敲除小鼠表现出子宫接受态的改变，并且在粘附反应过程中，Cox2—一种在前列腺素合成过程中的关键限速酶，在小鼠的正常植入过程和蜕膜化过程中都发挥重要作用—在p38α敲除的子宫植入位点附近表达下调，表明子宫中由PGs介导的信号通路发生了改变，但是p38α的缺失是如何影响了子宫接受态的建立以及影响PGs信号通路这一问题还需要更深入的研究来解决。
　　第二部分 蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2在小鼠卵泡发育过程的作用研究
　　卵泡作为卵巢中基本的结构和功能单位，可以分泌激素和产生雌性生殖细胞。一般来说卵泡的数量在生命早期就已经决定了，卵泡从在卵泡库中募集起始活化，在经历初级卵泡、次级卵泡直至有腔卵泡的发育过程后，一部分正常发育成熟并排出卵子，而更多的卵泡则走向了闭锁和凋亡。当卵泡库里面的卵泡耗竭的时候也就意味着生殖能力的结束。近几十年来，人们在卵泡发育领域做了大量的工作，解开卵泡发育过程中的众多谜团，极大地促进了人们对雌性生殖细胞发育过程的认知。在卵泡发育过程中，一些关键调控因子相互作用构成一个个庞大的信号网络，如MAPK通路、PI3K-Akt通路以及TGFβ等。Shp2是一种蛋白酪氨酸磷酸酶，在已有的研究表明Shp2作为一个广泛表达的蛋白，在许多细胞和组织中通过多种信号通路参与调控相应的生理活动。在我们的工作中，为研究Shp2在卵泡发育过程中的作用，我们首先检查了Shp2在卵泡发育过程的表达模式，通过原位杂交和免疫组织化学分析，我们发现Shp2在卵巢颗粒细胞和卵母细胞中都有表达，并且Shp2在腔前卵泡的卵母细胞中有较高的表达水平。利用Cre-loxp系统，我们在小鼠卵母细胞中和颗粒细胞中分别特异性的敲除Shp2，发现，颗粒细胞中Shp2缺失的小鼠生育能力没有明显异常，卵母细胞中敲除Shp2对青春期小鼠卵母细胞的质量以及体内激素水平没有明显异常，但是卵泡募集过程中的关键调控因子如FSHR、CX37和IGF1等表达水平分析推测Shp2可能参与卵泡的募集调节，具体机制还需要进一步探讨。在体外培养体系中，利用Shp2的抑制剂处理抑制Shp2活性后对FSH诱导的COCs卵丘扩展也没有明显影响。

目录

声明

第一部分 p38α在小鼠植入过程中的作用机制研究

摘要

第一章 前言

第一节 胚胎植入和蜕膜化综述

第二节 p38α功能概述

第二章 实验材料和方法

第一节 主要仪器和试剂

第二节 实验方法

第三章 实验结果

第一节 p38α在植入过程中的表达

第二节 子宫中p38α敲除后的小鼠不能生育

第三节 p38α对子宫接受态的建立和蜕膜化过程是必需的

四章 讨论

结论

展望

参考文献

第二部分 蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2在小鼠卵泡发育过程中的作用研究

摘要

第一章 前言

第一节 卵泡发育

第二节 蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2介绍

第二章 实验材料和实验方法

第一节 实验材料和器材

第二节 实验方法

第三章 结果分析

第一节 Shp2在卵巢中的表达和敲除效率

第二节 Shp2敲除小鼠的表型观察

第四章 讨论

结论

展望

参考文献

附录

致谢