新生大鼠坏死性小肠结肠炎肠组织磷脂酶A变化及预防性应用天然蒙脱石对肠损伤保护作用

摘要

本文对新生大鼠坏死性小肠结肠炎肠组织磷脂酶A<,2>变化及预防性应用天然蒙脱石对肠损伤保护作用进行了探讨。本研究分为两个部分：
　　 第一部分：新生鼠坏死性小肠结肠炎肠组织磷脂酶A2变化及意义。
　　 目的：探讨新生鼠坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis，NEC)时肠组织中磷脂酶A2(phospholipase A2，PLA2)变化，旨在阐明PLA2在NEC发病中的作用，为探讨新生儿NEC的发病机制及寻求有效的防治措施提供理论依据。
　　 方法：SD新生大鼠出生48小时开始给予鼠乳代用品人工喂养，100％氮气缺氧90秒，4℃冷刺激10分钟，每天2次，连续3天，建立新生SD大鼠NEC模型。20只新生SD大鼠随机分成NEC模型组和正常对照组。每组动物各10只。在最后一次缺氧、冷刺激后24小时空腹断头处死大鼠，所有新生鼠均留取回盲部近端肠管组织分别进行肠组织损伤评分和肠组织sPLA2检测。组织学评分≥2确定为NEC。ELISA法检测肠组织sPLA2含量(pg/mgprot)。应用Kruskal-Wallis H检验等方法进行统计学分析，α=0.05为显著性检验标准。
　　 结果：模型组新生鼠相继出现腹泻、腹胀、萎靡、活动减少，生长减慢，对照组新生鼠进食及排便均正常，无腹胀及胃潴留，活动度良好，皮下脂肪丰满。实验组和对照组肠损伤病理评分(x±s)分别为：3.25±0.85、0.45±0.51；肠组织PLA2含量(pg/mg prot)分别为1.752±0.483、0.669±0.180。两组间肠损伤组织评分和肠组织中sPLA2含量差别均有显著意义。肠组织PLA2含量与相应平均损伤程度均呈显著正相关关系(r=0.834，P=0.000)。模型组新生大鼠NEC的发生率为100％(10/10)，对照组无1例发生NEC。
　　 结论：肠组织PLA2可能是NEC发生的关键介质，其本身又作为致病因子参与了NEC的发生和发展。肠损伤程度与肠组织中PLA2含量呈正相关，肠组织中PLA2含量与肠黏膜损伤评分一样能反映肠黏膜损伤程度。
　　 第二部分：预防性应用天然蒙脱石对新生鼠坏死性小肠结肠炎肠损伤及肠组织PLA2影响。
　　 目的：探讨预防性应用天然蒙脱石对新生鼠坏死性小肠结肠炎(NEC)模型肠损伤保护作用及可能机制，为预防性应用天然蒙脱石防治NEC提供科学依据。
　　 方法：按析因设计，32只新生SD大鼠出生后48h按有否造模(A因素)、有否预防性应用天然蒙脱石干预(B因素)两因素两水平，分成4组，A1B1组为NEC模型组并在出生48h起每日给予天然蒙脱石灌胃(0.6g/kg/d)；A1B2组为NEC模型组，未添加天然蒙脱石；A2B1组为对照组并给予天然蒙脱石灌胃(0.6g/kg/d)；A2B2组为对照组，未添加天然蒙脱石。每组动物各8只。在最后一次缺氧、冷刺激后24h空腹断头处死大鼠，留取十二指肠下端至直肠上端肠管进行肠组织损伤评分和肠组织中PLA2含量检测。肠损伤组织学评分≥2确定为NEC；肠组织中PLA2含量采用ELISA双抗体夹心法检测(pg/mgprot)。应用Kruskal-Wallis H检验和析因设计的方差分析进行统计学分析，α=0.05为显著性检验标准。
　　 结果：A1B1组、A1B2组新生SD大鼠出现腹泻、腹胀、萎靡、活动减少，生长减慢，A1B1组程度较轻；A1B1组、A1B2组、A2B1组及A2B2组肠组织损伤评分分别为1.42±0.35、3.54±0.50、0.17±0.18和0.13±0.17，肠组织中PLA2含量为：1.1400±0.5349pg/mgprot、1.7625±0.4993pg/mg prot、0.4305±0.2054 pg/mg prot和0.5555±0.2476pg/mg prot。A1B2组肠组织损伤评分和肠组织中PLA2含量显著高于A2B2组、A2B1组；与A1B2组相比，A1B1组肠损伤组织评分明显降低，肠组织中PLA2含量亦明显减少，仍高于A2B1组、A2B2组；预防性应用天然蒙脱石引起肠损伤组织评分降低的平均主效应为-2.03，肠组织PLA2含量减少的平均主效应分别为-0.9721pg/mgprot；在控制造模因素后，预防性应用天然蒙脱石组和没有预防性应用天然蒙脱石组肠损伤组织评分的边缘估计均值及95％CI为：0.792(0.623，0.960)，1.833(1.665，2.002)，PLA2含量边缘估计均值及95％CI分别为：0.785(0.581，0.990)pg/mgprot，1.159(0.954，1.364)pg/mgprot，差别均有统计学意义。
　　 结论：预防性应用天然蒙脱石可以降低由人工喂养、缺氧冷刺激所引起的新生大鼠肠损伤程度，降低其肠组织中PLA2含量，具有抗NEC的保护作用。预防性应用天然蒙脱石可能通过保持肠粘膜屏障、减少肠道微生物移位及其后对肠组织PLA2的影响下调对机体有害的炎症级联反应等作用，从而减轻肠损伤，降低新生大鼠发生NEC危险性。

目录

论文说明：英文缩写对照表

声明

第一部分 新生鼠坏死性小肠结肠炎肠组织磷脂酶A2变化及意义

前言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第二部分 预防性应用天然蒙脱石对新生鼠坏死性小肠结肠炎肠损伤及肠组织PLA2影响

前言

材料与方法

结果

讨论

参考文献

结论

综述 肠道黏膜上皮细胞紧密连接与肠黏膜损伤

致谢

附录 攻读硕士学位期间发表的学述论文