双歧杆菌对新生大鼠坏死性小肠结肠炎肠损伤及肠细胞凋亡影响

摘要

目的：探讨添加双歧杆菌对新生鼠坏死性小肠结肠炎(necrotizing enterocolitis，NEC)模型肠损伤的保护作用。rn 方法：32只新生SD大鼠按析因设计随机分成4组，每组动物各8只。A1B1组为NEC模型组并添加双歧杆菌(109CFU/天)，A1B2组为NEC模型组，但未添加双歧杆菌；A2B1组为对照组并添加双歧杆菌(109CFU/天)。A282组为对照组，且未添加双歧杆菌。在出生48h开始给予鼠配方奶人工喂养，100％氮气缺氧908，4℃冷刺激10min，每天2次，连续3d，建立新生大鼠NEC模型；在最后一次缺氧、冷刺激后24h空腹断头处死小鼠。解剖留取十二指肠下端至直肠上端肠道组织，其中，回盲部近端肠管进行病理学检查及肠损伤评分，组织学评分≥2为NEC，其余肠管进行肠细胞凋亡率检测及电镜观察。采用流式细胞仪检测肠细胞凋亡率。SPSS11.0统计学软件进行统计分析，α=0.05为显著性检验标准。rn 结果：造模后，A1B1组、A1B2组相继出现腹泻、腹胀、生长发育减慢、活动度减少，显微镜下肠粘膜坏死、粘膜下层出血以及肌肉层坏死等肠损伤表现，透射电镜显示肠黏膜出现大量凋亡细胞。形成凋亡小体，但A1B1组程度较红。A1B1、A1B2、A2B1和A282 4组肠损伤组织病理评分(x±s)分别为2.04±0.52、3.38±0.55、0.33±0.36和0.38±0.33，肠细胞凋亡率分别为(23.97±10.48)％、(47.28±21.98)％、(11.42±4.75)％和(12.16±4.95)％；各组间肠损伤组织评分、肠细胞凋亡率差别有显著意义(H分别为26.657、20.916，P均<0.01)；与A1B2组相比，A1B1组新生鼠肠损伤组织评分、肠细胞凋亡率均明显降低，但仍高于A2B1、A2B2两个对照组(P均<0.01)；肠组织损伤评分值、肠细胞凋亡率均受到NEC造模和添加双歧杆菌两个因素的影响，NEC造模与补充双歧杆菌之间均存在交互作用，在控制添加双歧杆菌因素后，NEC模型组和对照组鼠肠组织损伤评分的边缘估计均值及95％可信区间(95％CI)分别为：2.708(2.479，2.938)，0.335(0.125，0.584)，肠细胞凋亡率的边缘估计均值及95％可信区间(95％CI)分别为：35.62(29.15，42.10)％，11.79(5.32，18.27)％。在控制NEC造模因素后，添加双歧杆菌和没有添加双歧杆菌的新生鼠鼠肠组织损伤分级评分的边缘估计均值及95％可信区间(95％CI)分别为：1.209(0.979，1.438)，1.854(1.625，2.084)，肠细胞凋亡率的边缘估计均值及95％可信区间(95％CI)分别为：18.07(11.59，24.55)％，29.35(22.87，35.83)％，组间因素检验。P均<0.01。新生大鼠肠损伤程度与肠组织细胞凋亡率呈显著正相关(r凋亡率=0.783，P<0.01)。rn 结论：添加双歧杆菌可以降低新生鼠NEC肠损伤程度，可能通过抑制肠上皮细胞凋亡，从而降低新生大鼠发生NEC危险性。