吲哚胺2,3-二氧化酶在同种异体移植肝细胞内的表达及作用

摘要

目的：研究携带吲哚胺2,3-二氧化酶(indoleamine2,3-dioxygenase,IDO)的肝细胞在同种异体脾内的表达及作用机制。方法：BABL/c肝细胞移植C57BL/6小鼠脾内，随机分为四组：I组:携带IDO腺病毒组；II组：携带IDO腺病毒+1-MT（1-甲基色氨酸）组;III组：空壳腺病毒；IV组：单纯肝细胞移植。转染后36-48小时采用门静脉灌注法分离肝细胞并离心进行纯化，荧光显微镜观察EGFP的瞬时表达情况，计算转染率，用台盼蓝拒染法检查细胞活性，分别用RT-PCR、Western Blot技术对IDO的表达情况进行检测。将肝细胞进行脾内移植，术后2、5日处死小鼠取脾脏，做免疫组化检测IDO表达情况，并进一步做TUNEL检测脾脏淋巴细胞凋亡情况。结果：成功分离并纯化肝细胞，数量为1.62×108／只，转染率为24.7％，活性为95％。RT-PCR、Western-Blot可以检测到IDO基因及蛋白质表达。免疫组化显示I组脾脏有IDO阳性的肝细胞。TUNEL显示I组与与其他组比较，差异有统计学意义(P<0.05)， II、III、IV组之间比较，差异无统计学意义 (P>0.05)。结论：携带IDO的肝细胞能在同种异体脾内稳定表达，并能诱导脾内淋巴细胞的凋亡。

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肝细胞移植中免疫排斥反应研究进展(综述)