DLL4基因对白血病细胞株K562细胞中YY1和c-Myc蛋白表达及细胞生长的影响

摘要

目的：本文采用转染基因真核表达载体技术将pBudCE4.1-DLL4通过Lipofectamine 2000转染慢性髓细胞白血病细胞株K562，观察Notch的配体DLL4在白血病细胞株K562中对转录因子YY1和原癌基因c-Myc蛋白表达及K562细胞生长的影响，进而研究在这个通路中转录因子YY1是否活化，参与Notch信号通路及其对c-Myc和白血病细胞生长情况的作用。
　　 方法：试验分三组：正常对照组、阴性对照组（转染质粒pBudCE4.1）和实验组（转染质粒pBudCE4.1-DLL4）。用脂质体Lipofectamine 2000法将各组质粒转染白血病细胞，①转染48小时后，收集各组细胞，用RIPA裂解细胞，免疫印记法（Westen bolt）检测外源性DLL4瞬时转染的表达水平和各组细胞中YY1和c-Myc蛋白的表达水平；②转染48小时后，收集各组细胞，细胞涂片用间接免疫细胞化学法检测各组细胞中YY1和c-Myc蛋白的表达水平；③用Cell Counting Kit-8法检测各组光吸收值；转染后48小时后，用流式细胞仪检测各组细胞的周期分布情况和凋亡。
　　 结果：通过Lipofectamine 2000，体外成功地将各组质粒转染入K562细胞，48小时后，①用Westen bolt检测到各组K562细胞外源性Dll4、YY1和c-Myc蛋白的表达，用Quantity 0ne软件行半定量分析,用SPSS统计软件进行数据处理及分析，实验组的DLL4、 YY1和c-Myc蛋白表达量比两个对照组显著增多，且p<0.05,有统计学意义。②用间接免疫细胞化学技术检测到各组K562细胞YY1与c-Myc蛋白的表达，秩和检验比较：实验组YY1和c-Myc蛋白表达量与两个对照组比较显著增多，p<0.05，有统计学意义。③做各组K562细胞的生长曲线，实验组K562细胞的生长速度明显低于两个对照组；经流式细胞仪检测，实验组较对照组G0/G1期细胞增多，p<0.001，凋亡率增加，p<0.001,有统计学意义。
　　 结论：重组质粒pBudCE4.1-DLL4体外转染白血病细胞K562后，DLL4的蛋白表达量增多，并引起细胞转录因子YY1蛋白量表达增多，原癌基因c-Myc的蛋白表达量增加，K562细胞的生长速度减慢、诱导细胞周期停滞于G0/G1期和凋亡，而由DLL4引起的c-Myc蛋白表达增高对于K562细胞的生长没有促进作用。

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文摘

英文文摘

声明

引言

第一部分 采用免疫印记法研究DLL4、YY1和c-Myc在K562细胞中的表达

第二部分 采用细胞免疫组化法研究YY1和c-Myc在K562细胞中的表达

第三部分 研究DLL4基因对白血病细胞的影响

结论

参考文献

致谢

综述 Notch信号在白血病中的作用机制与靶向治疗