shRNA沉默FAK基因抑制胃癌生长及转移的体内实验研究

摘要

目的：
　　研究FAK基因沉默后裸鼠胃癌模型体内肿瘤生长及转移的变化。
　　方法：
　　培育SGC-7901细胞（空白对照组）；转染FAK-shRNA慢病毒载体的SGC-7901细胞（干扰实验组）；转染阴性对照shRNA慢病毒载体的SGC-7901细胞（阴性对照组）；在G418浓度为600ug/ml的条件下筛选获得稳定转染的细胞株；体外用Western Blot方法检测三组细胞FAK蛋白的表达；将裸鼠随机分为6组，采用三组细胞反复传代，接种到裸鼠体内，各建立人胃癌裸鼠皮下移植模型和原位移植模型，观察裸鼠体内肿瘤生长及转移情况；用RT-PCR，免疫组织化学染色检测瘤体FAK的表达情况。
　　结果：
　　1.Western Blot检测，干扰实验组FAK蛋白较阴性对照组、空白对照组明显减少。
　　2.裸鼠皮下移植肿瘤生长大小：干扰实验组(1.474±0.9840g)与阴性对照组(3.134±0.3299g)、空白对照组(2.687±0.3827)比较，差异有统计学意义(P<0.05);阴性对照组和空白对照组比较，差异无统计学意义；裸鼠原位肿瘤模型体内转移情况：干扰实验组肝脏转移1只，无腹腔转移；阴性对照组肝脏转移6只，腹腔转移4只；空白对照组肝脏转移5只，腹腔转移4只；干扰实验组与阴性对照组和空白对照组有显著统计学差异。
　　3.瘤体RT-qPCR检测，干扰实验组FAK的mRNA明显低于阴性对照组和空白对照组。
　　结论：
　　1.FAK-shRNA能明显抑制胃癌SGC-7901中FAK的表达；
　　2.在裸鼠内体，FAK-shRNA显著降低胃癌裸鼠移植瘤瘤体FAK基因的mRNA转录；
　　3.FAK基因沉默后能抑制裸鼠体内胃癌的生长及远处转移。

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缩略语表

前言

体外实验稳定FAK基因沉默胃癌SGC-7901细胞的建立

1.材料

2 实验方法

3 . W estern b lot检测FAK蛋白的表达情况

结果

（一）不同感染复数对S GC-7901细胞的影响

（二）G418的药物筛选浓度

（三）稳定F Ak沉默S GC-7901细胞株的建立

（四）Western Blot检测FAK蛋白的表达情况

体内实验RNAi沉默FAK表达对SGC-7901细胞增殖及转移的体内实验

1.材料

2.实验方法

结果

1、各皮下实验组裸鼠的成瘤率

2、各皮下实验组成瘤情况比较

3、皮下实验组裸鼠瘤体体积和重量的比较

5.皮下实验组肿瘤病理切片及染色比较：

6..各组原位肿瘤的转移情况比较

讨论

1.转染FAK-shRNA的干扰实验组、空质粒shRNA的阴性对照组和空白对照组的细胞的筛选

2. shRNA沉默FAK基因对裸鼠体内肿瘤生长及转移的影响

结论

参考文献

附图1

致谢

FAK在胃癌转移中的研究进展(综述)

参考文献