浒苔多糖粗提物对巨噬细胞RAW264.7免疫调节作用及可能机制研究

摘要

目的：通过体外实验研究浒苔多糖粗提物对巨噬细胞株RAW264.7增殖，分泌细胞因子IL-6、TNF-α水平等细胞活性的变化，验证其调节免疫作用；并从浒苔多糖粗提物引起RAW264.7中mTOR mRAN表达变化来探讨可能的活化分子机理，为研究开发浒苔多糖提供依据。
　　方法：
　　1.细胞的复苏培养、传代、冻存和实验前处理。
　　2.检测不同剂量时间浒苔多糖粗提物对巨噬细胞RAW264.7增殖的影响：显微镜下观察细胞形态并成像；噻唑蓝（MTT）比色法检测增殖作用；
　　3.酶联免疫法（ELISA）检测不同剂量/时间浒苔多糖粗提物对巨噬细胞RAW264.7分泌细胞因子IL-6、TNF-α水平的影响；
　　4.Real Time PC R检测不同剂量/时间浒苔多糖粗提物对巨噬细胞RAW264.7 mTOR基因表达相对定量变化的影响。
　　结果：
　　1.随干预剂量增加，镜下RAW264.7数量增多，体积变大细胞更多，分化愈明显；但随时间延长，RAW264.7数量减小，细胞体积变大。一定作用浓度下有随干预浓度增加相对细胞增殖率呈上升趋势；随时间延长各剂量组吸光度下降，其细胞增殖力减弱。
　　2.浒苔多糖粗提物对巨噬细胞RAW264.7促进分泌细胞因子IL-6、TNF-α：在15.625-1000μg/mL范围内RAW264.7分泌IL-6作用呈剂量依赖性；低浓度范围（500μg/mL以下）RAW264.7分泌呈剂量依赖性，高浓度（1000μg/mL）RAW264.7分泌TNF-α作用减弱。
　　3.mTOR基因表达：浒苔多糖粗提物对RAW264.7巨噬细胞mTOR基因表达明显促进作用,有一定的剂量依赖性。
　　结论：
　　1.浒苔多糖在一定作用浓度范围、时间内有促进巨噬细胞RAW264.7增殖，初步证实其具有促进巨噬细胞增殖的活性，细胞增殖具有剂量依赖性,无细胞毒性,促进巨噬细胞增殖可能是浒苔多糖发挥免疫调节作用的方式之一。
　　2.浒苔多糖粗提物对巨噬细胞RAW264.7分泌细胞因子IL-6、TNF-α有促进作用；说明浒苔多糖有明显的免疫增强活性，进一步表明其有助于促进细胞介导免疫反应。
　　3.巨噬细胞相对增殖率和细胞因子TNF-α与IL-6的分泌随巨噬细胞培养时间的延长而有增加趋势，但不同干预时间增加趋势略有不同。提示可能原因如下：①培养基消耗致营养缺乏导致巨噬细胞 RAW264.7大量分泌细胞因子，②炎症细胞因子对巨噬细胞RAW264.7自噬作用。③浒苔多糖的作用。
　　4.浒苔多糖粗提物促进巨噬细胞RAW264.7 mTOR基因表达，与其促进巨噬细胞 RAW264.7增殖和促进免疫活化有一致效应，提示P13K／AKT-PTEN-mTOR信号转导通路可能与巨噬细胞RAW264.7免疫调节有关联。

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前言

一、多糖对巨噬细胞功能影响及机制研究概况

二、此项研究立题依据

第 一 章 浒 苔 多 糖 粗 提 物 对 巨 噬 细 胞 RAW264.7 增殖 作 用 的 影 响 初 探

1．材料和方法

2、结果

3、讨论

第 二 章浒 苔 多 糖 粗 提 物 对 RAW264.7分 泌 细 胞因 子 IL-6和 TNF-α 的 影 响

1、材料和方法

2、结果

3、讨论

第 三 章浒 苔 多 糖 粗 提 物 调 节 RAW264.7表 达mTOR基 因 的 研 究

1．材料和方法

2 结果

3、讨论

结论

参考文献

研究生期间参加课题及发表的论文情况

研究生期间获得荣誉情况

致谢

文献综述