松树皮提取物原花青素对小鼠脑缺血再灌注损伤海马CA3区的保护作用

摘要

目的：探讨松树皮提取物原花青素对小鼠缺血再灌注脑损伤海马CA3区神经元的保护作用及其机制。
　　方法:120只健康昆明种小鼠随机分为正常对照组、假手术组、14天模型组、28天模型组、14天治疗组、28天治疗组，共6组。采取小鼠双侧颈总动脉结扎15 min，再灌注15 min构建脑缺血再灌注损伤模型，治疗组在处死前7 d连续给予松树皮提取物原花青素100mg/(kg.d)灌胃治疗，对照组和假手术组给予等量体积的生理盐水灌胃。治疗结束后 Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力，比色法测定海马组织超氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽（GSH）及丙二醛(MDA)含量，ELISA法测定海马组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-2（IL-2）以及白介素-6（IL-6）的表达变化。同时光镜下观察小鼠海马组织形态学改变，透射电镜下观察海马神经元超微结构变化，免疫荧光检测海马 CA3区胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）的变化，蛋白印迹检测海马内核因子-κB（NF-κB）、半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）的变化。
　　结果：与正常对照组相比，模型组小鼠的学习记忆能力下降，且随时间的延长下降越明显；与模型组相比，治疗组小鼠的学习记忆能力增强。与模型组相比，治疗组小鼠海马CA3区组织SOD、GSH含量显著升高，而MDA含量却明显下降。与模型组相比，治疗组小鼠海马CA3区脑组织TNF-α、IL-2以及IL-6蛋白表达与同期模型组比较含量明显降低。光镜下，14天模型组脑细胞数量较假手术组明显减少，胞浆着色浅，胞核移位；治疗组尼氏体排列欠规律，部分细胞形态不规则，胞浆着色变浅。电镜下，小鼠海马CA3区神经元在14天模型组神经元胞体水肿、出现核固缩溶解现象，细胞器溶解后形成空泡，线粒体嵴断裂，细胞出现凋亡小体；28天模型组有所恢复，14天和28天治疗组神经元较受损同期模型轻。免疫荧光染色显示治疗型组小鼠海马CA3区GFAP阳性细胞较模型组明显减少，阳性反应产物平均光密度降低。Western blot显示治疗各组小鼠海马CA3区组织NF-κB、caspase-3蛋白表达含量与模型组各组比较明显下降。
　　结论：松树皮提取物原花青素可以明显改善缺血再灌注脑损伤小鼠的学习记忆能力，使脑组织中MDA含量降低，SOD、GSH含量升高，不同程度的减轻神经元的损害，抑制星形胶质细胞反应性增生，其相关机制可能与其降低 NF-κB、caspase-3、TNF-α、IL-2以及 IL-6表达有关，其对脑缺血再灌注损伤小鼠具有保护作用。

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综述：原花青素对缺血再灌注脑损伤神经元保护的研究进展

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