天麻提取物对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的机制研究

摘要

目的:脑缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤是大多数ICVD的主要病理生理过程.一氧化氮(NO)是生物体内重要的信使分子和效应分子,有研究表明NO在脑缺血性损伤发病中起重要作用,脑缺氧缺血时,由于能量代谢衰竭,可致离子泵功能障碍,兴奋性氨基酸释放,大量Ca2+内流,激活Ca2+依赖性一氧化氮合酶(NOS),导致NO的过量合成.NO是重要的扩血管物质，具有神经保护和神经毒性的双重作用，其不同的作用依赖于NO的起源。源于内皮型NOS(endothelialNOS,eNOS)产生的NO有神经保护作用，源于神经型NOS(neuronal NOS,nNOS)和诱导型NOS(inducible NOS, iNOS)过度表达所形成的NO有神经毒性作用，参与缺血性脑损伤的发展，可加重脑损伤。本实验室前期研究结果表明，天麻具有较强的抗大鼠脑缺血及脑缺血再灌注损伤作用，其作用机制与减轻钙超载和抗自由基损伤有关，且其脑保护作用活性部位集中于天麻乙酸乙酷提取部位。故本研究采用线栓法复制大鼠脑缺血再灌注损伤(MCAO/R)模型，通过测定缺血侧脑组织NO的含量以及nNOS、iNOS、eNOS的活性，探讨天麻提取物对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的机制。rn 方法:将体重在250-300g的雄性(Sprague Dawley,SD)大鼠，SPF级，随机分为假手术组、模型组、天麻乙酸乙酷提取物高剂量组和低剂量组4组，每只大鼠按lml/100g体积灌胃给药，假手术组和模型组灌胃给予等体积溶媒(含吐温一80的蒸馏水)，给药组灌胃给予天麻提取物溶液，连续给药5天后采用线栓法复制大鼠脑缺血再灌注损伤(MCAO/R)模型，每组动物手术缺血2h，再灌注24h后快速断头取脑，缺血侧脑组织匀浆、离心后取上清液，采用硝酸还原酶法检测大鼠缺血侧脑组织中NO的含量及酶联免疫法检测大鼠缺血侧脑组织中eNOS、nNOS、iNOS的活性。rn 结果:与假手术组比较，模型组大鼠脑组织NO(P<0.001)的含量，nNOS(P<0.01),iNOS(p<0.05)的活性均明显升高，eNOS的活性无明显变化;与模型组比较，天麻提取物高<7.29g生药ncg体重)、低剂量(0.81g生药/kg体重)组均能明显降低模型大鼠缺血侧脑组织NO(p<0.001,p<0.01)的含量、i1VOS(p<0.05)和nNOS(p<0.01,p<0.05)的活性，但对eNOS的活性无明显影响。rn 结论:天麻提取物可能是通过降低iNOS,nNOS的活性、减少NO的含量而达到对脑缺血再灌注大鼠脑组织一氧化氮损伤的保护作用。