天麻提取物对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

摘要

随着人口老龄化的加剧，脑血管疾病已成为一个倍受社会关注的问题，据世界卫生组织调查表明，脑血管意外引起的死亡率占所调查的57个国家死亡总人数的11.3％，仅次于癌症和心肌梗死，而缺血性脑血管损伤是脑血管疾病最主要的病种，在我国，其死亡率仅次于恶性肿瘤，严重危害人类的健康。目前相应治疗药物的开发以钙拮抗剂、抗血小板药、溶栓剂等为主，但疗效仍不能令人满意。近代药理学研究表明天麻具有扩张血管，增强血管弹性，改善基底动脉供血的作用，临床亦报道天麻可以明显改善与脑供血不足有关的老年痴呆的症状。我们前期的研究表明：天麻总提物及天麻乙酸乙酯提取物能抑制细胞外Ca2+内流和细胞内Ca2+释放，而Ca2+超载是缺血性脑血管损伤的重要机制之一，故本研究通过复制大鼠脑缺血再灌注损伤模型，探讨天麻总提物和天麻乙酸乙酯提取物(合称天麻提取物)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。 方法：1.天麻的提取与分离应用乙醇提取，乙酸乙酯萃取的方法，制备实验用药。2.大鼠脑缺血再灌注损伤模型的复制参照Longa、Kuga等及国内报道的方法，采用颈外动脉插入线栓法造模。利用神经病学检查和TTC染色法判断大鼠造模是否成功。3.天麻提取物对脑缺血再灌注损伤模型大鼠神经病学的影响参照经修改的Bederson评分法作为评分标准。4.天麻提取物对脑缺血再灌注损伤模型大鼠体质量的影响体质量下降的比率=(术前体重-术后体重)/术前体重×100％ 5.天麻提取物对脑缺血再灌注损伤模型大鼠血清中SOD和MDA的影响采用化学比色法检测血清SOD活性和MDA含量。6.天麻提取物对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑指数和脑组织内水分含量的影响采用干湿重法测定脑组织内水分含量。脑指数=脑湿重/体质量(mg/g)。7.天麻提取物对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑梗塞体积的影响采用TTC染色，Motic Images Plus 2.0显微图象分析系统计算梗塞体积。8.天麻提取物对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑组织病理学的影响采用HE染色观察脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑组织的病理改变；免疫组织化学法测定脑组织内CaMKII表达。 结果：1.天麻的提取与分离天麻原药材共5000g，得醇提总浸膏467.7g，取出162.7g总浸膏作为天麻总提物备用，剩余305g总浸膏用乙酸乙酯萃取得乙酸乙酯提取物33.28g。2.大鼠脑缺血再灌注损伤模型的复制大鼠脑缺血再灌注损伤模型复制成功，神经病学评分为1.75±0.27(分)水肿修正后脑梗塞体积为60.35±44.40(×10-6mm3)，梗塞率为18.24％。3.天麻提取物对脑缺血再灌注损伤模型大鼠神经病学的影响天麻提取物能明显改善模型大鼠的神经病学症状，其中天麻乙酸乙酯提取物高剂量组、低剂量组与模型组比较P<0.01，天麻总提物组与模型组比较P<0.05。4.天麻提取物对脑缺血再灌注损伤模型大鼠体质量的影响天麻提取物对模型大鼠体质量的下降也有所改善，其中天麻乙酸乙酯提取物高剂量组与模型组比较P<0.05，天麻总提物组与模型组比较P=0.062(接近0.05)。5.天麻提取物对脑缺血再灌注损伤模型大鼠血清中SOD和MDA的影响天麻提取物有升高模型大鼠血清SOD活性，降低MDA含量的趋势。(1)SOD活性变化：天麻乙酸乙酯提取物高剂量组、低剂量组与模型组比较P=0.080。(2)MDA含量变化：天麻乙酸乙酯提取物高剂量组、低剂量组与模型组比较P=0.088。6.天麻提取物对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑指数和脑组织水分含量的影响天麻乙酸乙酯提取物高剂量组与模型组比较：脑指数P=0.059；脑组织内水分含量P<0.05。其余各给药组与模型组比较均能降低模型大鼠脑指数和脑组织水分含量，但结果无统计学意义。7.天麻提取物对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑梗塞体积的影响天麻提取物能明显缩小模型大鼠的脑梗塞体积，其中天麻乙酸乙酯提取物高剂量组、低剂量组、天麻总提物组与模型组比较P<0.05。8.天麻提取物对脑缺血再灌注损伤模型大鼠脑组织病理学的影响 (1)天麻提取物能减轻模型大鼠脑组织神经细胞肿胀，减少嗜中性粒细胞浸润。(2)天麻提取物能明显增强模型大鼠脑组织CaMK II的表达，其中天麻总提物组与模型组比较尸<0.01，天麻乙酸乙酯提取物高剂量组、低剂量组与模型组比较P<0.05。 结论：1.应用乙醇提取，乙酸乙酯萃取的方法对天麻进行提取分离，可较好地得到实验用药。2.大鼠脑缺血再灌注损伤模型复制成功，可用此方法复制实验用动物模型。3.天麻提取物能够明显改善模型大鼠的神经病学症状。4.天麻提取物能够改善模型大鼠体质量的下降。5.天麻提取物能在一定程度上起到抗氧化作用，减轻自由基引起的脑缺血损伤。6.天麻提取物能在一定程度上减轻脑缺血再灌注损伤引起的脑水肿。7.天麻提取物能明显缩小模型大鼠的脑梗塞体积，减少神经细胞坏死。8.天麻提取物能减轻模型大鼠脑组织神经细胞肿胀，减少嗜中性粒细胞浸润。增强CaMK II的表达，减轻钙超载。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文索引表

声明

引言

实验研究内容第一部分天麻的提取与分离

实验材料

实验方法与结果

实验研究内容第二部分大鼠脑缺血再灌注损伤模型的复制与评价

实验材料

实验方法与结果

实验研究内容第三部分天麻提取物对大鼠脑缺血再灌注损伤模型保护作用的实验研究

实验材料

实验方法与结果

讨论

参考文献

综述一脑缺血--再灌注损伤及其治疗策略

综述二钙超载与脑缺血再灌注损伤的研究进展

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