RNA干扰抑制MACC1对大肠癌细胞增殖及其与上皮-间质转化关系的研究

摘要

目的:探讨采用RNA干扰方法抑制MACC1基因表达对大肠癌细胞SW620增殖及上皮间质转化的影响。
　　方法:本实验用脂质体LipofectamineTM2000介导,将设计并合成的靶向MACC1特异性的MACC1-siRNA转染入人结肠癌细胞株SW620,同时设立阴性对照和空白对照。倒置显微镜下观察各组细胞的形态学变化。MTT检测细胞增殖活性的变化情况,并绘出各组细胞的生长曲线。采用Western blot技术检测空白组(正常非转染组)、阴性对照组和MACC1siRNA组细胞E-cadherin和Vimentin的表达。细胞免疫荧光染色观察E-cadherin和Vimentin在SW620细胞中MACC1干预下的表达。激光扫描共聚焦显微镜观察鬼笔环肽染色后细胞骨架微丝的变化。
　　结果:SW620细胞瞬时转染效率约为70-80％。倒置显微镜下观察发现,转染MACC1-siRNA后,SW620细胞增殖明显减弱,细胞数量减少。MTT结果显示,与阴性对照组和空白对照组相比,RNAi组细胞增殖能力明显减弱(P均<0.05)。Western Blot结果显示:与对照组相比,MACC1siRNA组Vimentin的表达显著减弱(P<0.05),E-cadherin的表达显著增强(P<0.05)。免疫细胞荧光结果显示:转染MACC1-siRNA能显著降低SW620细胞的Vimentin的表达而促进E-cadherin的表达。激光共聚焦显微镜观察发现干扰MACC1表达后SW620细胞表面微丝减少,变稀疏,细胞骨架发生重新排列。
　　结论:以MACC1为靶点,应用RNA干扰技术能明显抑制人大肠癌细胞株SW620的增殖和上皮间质转化过程,MACC1基因可能成为大肠癌分子治疗的潜在靶标。

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中英文缩略词

前言

材料与方法

1. 实验材料

2.实验试剂和设备

2.1 主要试剂

2.2 siRNA靶序列的设计与合成:

2.3 主要仪器和设备

2.4主要试剂的配制

3.方法

3.1细胞培养

3.2 细胞瞬时转染

3.3 细胞转染

3.4 计算转染效率

3.5 MTT比色法测定细胞生长曲线

3.6 Western Blot

3.7 免疫荧光染色

3.8激光共聚焦显微镜检测细胞骨架

4. 统计学处理

结果

一、转染靶向MACC1-siRNA对SW620细胞形态的影响

二、靶向MACC1-siRNA的转染效率

三、靶向抑制MACC1基因对SW620细胞增殖的影响

四、靶向抑制MACC1基因表达对SW620 细胞Vimentin表达的影响

五、靶向抑制MACC1基因表达对SW620 细胞E-cadherin表达的影响

六、靶向抑制MACC1基因表达对SW620细胞骨架的影响

讨论

结论

参考文献

致谢

综述