泛素连接酶Fbw7增强胆管癌细胞株QBC939对化疗药物敏感性的研究

摘要

目的:研究泛素连接酶Fbw7在胆管癌细胞株QBC939化疗敏感性中的作用,并探讨其机制。
　　方法:在体外培养人胆管癌细胞株QBC939,MTT法检测5-氟尿嘧啶、表柔比星、丝裂霉素、奥沙利铂、顺铂五种临床常用化疗药物对细胞的抑制作用;Fbw7介导下化疗药物对QBC939的抑制作用。WesternBlot检测Fbw7以及p-erk、erk、Bcl-2、Mcl-1、AIB1、PARP的表达情况。
　　结果:5-氟尿嘧啶、表柔比星、丝裂霉素、奥沙利铂、顺铂对胆管癌细胞株QBC939有明显抑制作用,且呈浓度依赖;过表达和干扰Fbw7分别抑制、促进QBC939的增殖;过表达后化疗药物对QBC939的抑制作用更明显,干扰Fbw7后则被减弱;顺铂、表柔比星均能下调p-erk、erk、Bcl-2、Mcl-1、AIB1的表达;Fbw7能下调Mcl-1、AIB1的表达。
　　结论:化疗药物在细胞水平对胆管癌细胞株QBC939起到有效抑制,一方面通过抑制Mcl-1、Bcl-2以及AIB1蛋白的表达,另一方面通过MAPK信号通路发挥作用。Fbw7增强胆管癌细胞QBC939对化疗药物的敏感性,结果显示可能与AIB1、Mcl-1有关。

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第一章 前言

第二章 实验材料

1. 细胞株

2. 主要仪器及设备

3. 主要试剂

4. 主要溶液的配制

5. 质粒与菌种

第三章 实验方法

1.感受态细胞的制备与转化

2.质粒扩增

3.siRNA设计

4.细胞培养

5.质粒转染以及siRNA干扰

6.细胞毒性实验（MTT法）

7.流式细胞术分析

8. Westen Blot 检测蛋白水平表达

8. 免疫荧光技术

9. 统计学方法

第四章 实验结果

1. 化疗药物对胆管癌细胞株QBC939的抑制作用

2.质粒Pc DNA3.1-Fbw7酶切鉴定与扩增后鉴定

3. 过表达以及干扰Fbw7的表达

4. Fbw7对QBC939细胞增殖的影响

5. Fbw7对QBC939细胞周期的影响

6. Fbw7对QBC939细胞凋亡的影响

7. Fbw7介导的化疗药物对QBC939的抑制作用

8. 化疗药物以及Fbw7对QBC939细胞中Mcl-1等蛋白的影响

第五章 讨 论

第六章 结 论

参考文献

胆管癌耐药机制的研究进展

硕士期间发表的文章

致谢