抗-OX40/抗-AFP-纳米微粒在CTL抗肝癌中作用的实验研究

摘要

目的：1.利用生物相容性和生物可降解乳酸-羧基乙酸共聚物（PLGA）制备的纳米微粒并与抗-OX40及抗-AFP抗体偶联。2.观察抗-OX40/抗-AFP纳米微粒对CTL生物学效应及抗肝癌作用的影响。
　　方法：1.根据沉淀法用PLGA、乙腈和F-127制备PLGA纳米微粒，并用NHS和EDC活性偶联剂在纳米微粒表面偶联上抗-OX40抗体和抗-AFP抗体。2.分离外周血单个核细胞，用VarioMACS系统分选纯化CD14+、CD8+细胞，用“IL-4+GM-CSF”定向扩增分化CD14+为DC细胞，用丝裂霉素灭活DC细胞,与CD8+细胞按照比例混合培养CTL细胞。3.用WST-1、ELISA方法分别检测偶联抗-OX40/抗-AFP-纳米微粒对CTL细胞增殖作用影响，以及细胞培养液中IL-2和IFN-γ含量。4. LDH方法检测抗-OX40/抗-AFP-纳米微粒对CTL抗肝癌作用的杀伤效率。
　　结果：1.在扫描电镜下观察制备的 PLGA纳米微粒，形貌为大小较均匀的圆形颗粒，平均粒径大小在396nm，粒径分布窄。Zetasizer检测PLGA纳米微粒Zeta电位为-(35.12±5.34)mV。使用BCA蛋白测定法测定 PLGA纳米微粒的载药量和包封率分别为（0.702±0.073）％、（16.7±0.17）%。2.用CD14+能成功诱导DC细胞，并且通过VarioMACS系统能获得较高纯度的CD8+细胞。3.偶联抗-OX40抗体/抗-AFP抗体的PLGA纳米粒子能有效诱导CTL细胞的增殖活化，增殖指数为(151.49±16.25)%，CTL所产生的IL-2、IFN-γ分别为（130.53±37.058）pg/ml、（265.37±17.05）pg/ml。4.在荧光显微镜下观察细胞膜染色的CTL和HepG2，加入抗-OX40/抗-AFP-纳米微粒中，CTL细胞与HepG2细胞两种细胞直接结合紧密，相同细胞比例中，加入抗-OX40/抗-AFP-纳米微粒的细胞结合的更加紧密，结合细胞数也更多。LDH实验结果显示：加入抗-OX40/抗-AFP-纳米微粒能显著提高CTL细胞对AFP阳性HepG2细胞的杀伤的作用（P＜0.05）。
　　结论：抗-OX40/抗-AFP-纳米微粒能有效刺激CTL细胞的增殖活化，同时抗-OX40/抗-AFP-纳米微粒能使靶细胞HepG2和效应细胞CTL两者之间更加紧密结合，增强CTL细胞对HepG2细胞的杀伤作用。

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前言

第一部分 P LG A纳米微粒的制备及抗体偶联

前言

1. 材料

2. 实验方法

3. 抗体偶联效率

小结

第二部分 抗OX40-抗AFP-纳米微粒对CTL生物学效应及抗肝癌作用的研究

前言

1.材料

2.实验方法

结果

讨论

一、肿瘤细胞表面MHC分子的水平的下降或缺如

二、肿瘤产生细胞因子的负性调节和免疫抑制

三、Fas/Fas L在肿瘤免疫逃逸中的作用

四、共刺激分子和粘附分子的缺失

小结

结论

参考文献

致谢

纳米微粒在肿瘤研究中的进展

参考文献：