树突状细胞模式识别受体在种植体相关免疫反应中的作用研究

摘要

种植体植入体内后表现出对软硬组织修复相关的宿主反应。最新的种植体设计利用机体对植入物的免疫反应，从而调高种植体的骨整合，避免发生慢性炎症和机体对外界物的排斥反应。DC细胞(dendritic cell)被认为是目前已知的功能最强大的专职抗原提呈细胞(antigen presenting cells，APC)，能够感知、整合一系列的外来病原体信号并将其传递给淋巴细胞，启动适度的免疫应答反应以清除入侵机体的病原体或调解机体对外界刺激物的反应。本实验将观察DCs在种植体免疫反应及免疫调节中所发挥的作用及相关机制。种植体表面生物材料将模拟生理条件下的细胞外基质（extracellularmatrix，ECM），通过树突状细胞的模式识别受体（pattern recognition receptors，PRR）激活或抑制相关的免疫细胞反应，从而促进种植体与机体的整合。DC细胞在机体应对外源性刺激的天然免疫和特异性免疫中对于维持机体免疫耐受扮演着重要的角色。在本实验中我们对骨髓来源的树突状细胞同时放入2种钛片进行刺激，分别是PT表面和SLA表面，先检测骨髓来源的树突状细胞在2种钛片表面的附着情况，收集上清后再次在分组中又加入了LPS溶液模拟炎症环境。检测刺激前后通过模式识别受体蛋白NLR受体、 NOD-2受体、TLR受体通路所相关的细胞因子，例如：IL-1β、IL-12p35、IL-12p40、IFN-γ、TGF-β的表达，对数据进行统计学分析。本研究提供了一些相关的证据证明钛片刺激有利于激活NOD-2受体通路，导致细胞因子表达的增加，并刺激了树突状细胞的成熟，在维持机体免疫平衡以及对抗外源性钛片刺激后的免疫调控也有一定的帮助。

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前言

实验一 BMDCs的提取，体外培养，钛片刺激前后形貌观测

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

结果和结论

1 实验材料金属分子检测

2 电子显微镜下各组细胞的形态

讨论

实验二 实时定量RT-PCR检测受刺激后BMDCs细胞所表达的细胞因子的水平

材料与方法

1 实验材料与器材

2 实验方法

结果

Real-time PCR检测树突状细胞的细胞因子表达水平

讨论

结论

实验三 流式细胞术检测BMDCs表面共刺激分子的表达以及ELISA检测细胞上清相关细胞因子的表达

材料与方法

1 实验材料

2 实验方法

结果

1 BMDCs细胞表面表型检测

2 流式细胞技术分析检测BMDCs细胞表面标记分子的表达

3 免疫酶联吸附实验（ELISA）检测BMDCs培养上清细胞分子水平

讨论

结论

实验四 蛋白免疫印迹实验检测BMDCs经钛片刺激后相关蛋白的变化

材料和方法

1 实验材料

2 实验方法

结果

讨论

结论

全文总结

参考文献

综述:钛种植体表面纳米改性及其与机体免疫应答

致谢