抑制结构蛋白基因对BMMSCs体外向心肌细胞分化过程中收缩蛋白基因表达的影响

摘要

本文探讨结构蛋白即肌联蛋白titin基因在骨髓间充质干细胞(BMMSCs)体外向心肌细胞分化过程中的作用及其对收缩蛋白基因肌球蛋白重链的β亚单位(β-MHC)和肌钙蛋白亚单位I(cTnI)基因表达的影响。本文在大鼠双侧股骨和胫骨的骨髓腔获得细胞，贴壁筛选法纯化BMMSCs并进行体外培养扩增。分别在诱导后1天、4天、7天、14天，显微镜下连续观察其形态变化，同时将携带有针对大鼠titinN2B区的siRNA重组质粒pSITITIN和针对人β-actin的siRNA重组质粒pSIACTIN,利用脂质体将上述重组质粒分别转染入诱导后的BMMSCs，转染后24小时，用Tripure提取各个时间点的RNA，半定量RT-PCR技术检测各时间点干扰前后结构蛋白titin基因和收缩蛋白β-MHC、cTnI基因在BMMSCs体外心肌细胞样分化过程中的动态表达。结果：1.诱导前titin、β-MHC、cTnI基因都有弱的表达，诱导后表达增强。2.重组质粒转染诱导后的BMMSCs，titin基因的表达减弱。3.titin基因的表达被干扰后，β-MHC基因的表达无明显变化，而cTnI基因的表达减弱。结论：1.BMMSCs是一种具有心肌源性的种子细胞2.titin基因可能是BMMSCs向心肌细胞分化发育过程中有重要意义的基因，对cTnI基因的表达有调控作用。

目录

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符号说明

前言

第一部分抑制结构蛋白基因对BMMSCs体外向心肌细胞分化过程中收缩蛋白基因表达的影响

材料与方法

结果

讨论

小结

附图

第二部分经BMMSCs诱导分化的心肌样细胞离子通道基因的表达

材料与方法

结果

讨论

小结

附图

参考文献

综述 膜片钳技术应用于心肌疾病研究的进展

致谢

攻读学位期间发表的论文