酵母双杂交RRS筛选系统中轮状病毒外壳蛋白VP4诱饵载体的构建

摘要

酵母双杂交技术自创立以来已成为研究蛋白之间相互作用的重要方法。传统的酵母双杂交所研究的蛋白间相互作用是在细胞核内完成的，而近年来发展起来的酵母双杂交衍生系统---Ras募集系统(RRS)，能够将蛋白间相互作用的研究定位在细胞膜上，更具备了灵敏度高、假阳性少等突出优点。在本研究中，我们利用了一对已知蛋白之间的相互作用来验证RRS筛选系统，以期将此筛选系统更广泛地运用于其他蛋白间相互作用的研究以及相互作用蛋白的钓取。 轮状病毒(RV)肠炎及其肠道外并发症是威胁儿童健康的重要疾病。RV 与其宿主细胞表面受体的结合是病毒感染的第一必备步骤，因此，明确RV受体性质，对该病的预防和治疗有十分重要的意义。现有研究提示，RV外壳蛋白VP4是病毒吸附受体的主要配体蛋白。在本研究中，我们采用 RT-PCR法扩增RV外壳蛋白VP4编码基因并将其克隆到Met425-Myc-Ras载体上，构建成适合于RRS筛选系统的诱饵质粒并排除了诱饵的自激活作用，表明我们可以将该诱饵质粒用于RRS筛选系统，为进一步从敏感细胞cDNA文库中钓取RV受体奠定了基础。

目录

论文说明：英汉缩略语名词对照

声明

摘要

第一部分：酵母双杂交RRS筛选系统对已知蛋白相互作用的验证

前言

1材料与方法

1.1实验材料

1.2实验方法

2结果

3讨论

4小结

第二部分：RRS筛选系统中轮状病毒外壳蛋白VP4诱饵载体的构建

前言

1材料与方法

1.1实验材料

1.2实验方法

2结果

3讨论

4小结

全文总结

参考文献

文献综述：轮状病毒与肠上皮细胞相互作用机制的研究进展

攻读学位期间完成的论文

致谢