结核分枝杆菌H37Ra预防小鼠结核病的实验研究

摘要

目的：1.通过结核分枝杆菌H37Ra体内生长特性初步探讨其毒力。 2.研究H37Ra对巨噬细胞的活化能力。 3.H37Ra诱导的细胞免疫应答及免疫保护效果的研究。 方法：1.将H37Ra、BCG和H37Rv分别感染BALB/c小鼠，观察在体内的增殖、肺脏脏器重量指数及病理改变。2.将H37Ra和BCG分别感染BALB/c小鼠巨噬细胞，半定量RT-PCR检测感染6h和24h后细胞因子的基因表达。3.BALB/c小鼠随机分为3组：H37Ra组、BCG组和NS组，分别用H37Ra、BCG和NS皮内注射，免疫后第6w，做小鼠PPD迟发型超敏反应实验。4.第8w处死部分小鼠，流式细胞分析仪检测小鼠脾淋巴细胞亚群的变化；MTT法检测脾淋巴细胞的刺激指数(SI)；ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞培养上清液中IFN-γ产生水平。5.免疫后第8w，用5×106CFU MTB毒株H37Rv经小鼠腹腔注射，4w后处死小鼠，取小鼠脾脏、肝脏和肺脏稀释匀浆分别接种于改良罗氏培养基，培养21d后计数CFU。6.测定小鼠脏器重量指数同时取肺组织做病理学检查。 结果：1.H37Ra在小鼠脾脏、肺脏增殖显著慢于H37Rv(P＜0.05)，较BCG稍快(P＞0.05)；肺组织脏器重量指数显著低于H37Rv(P＜0.05)，较BCG稍高(P＞0.05)；病理检测可见：H37Ra组和BCG组肺组织无明显病理变化，而H37Rv病变明显。2.H37Ra能诱导巨噬细胞表达较多的IL-12和TNF-α。3.H37Ra免疫小鼠后能诱导显著的迟发型超敏反应，以24h为最佳观测时间。4.H37Ra免疫小鼠脾脏CD3+T细胞的百分率为(41.63+1.68)％，显著高于NS对照组(38.44±1.87)％(P＜0.05)：H37Ra免疫小鼠脾脏CD3+T细胞、CD4+T细胞及CD8+T细胞的百分率与BCG免疫小鼠比较差异无统计学意义。脾淋巴细胞SI、IFN-γ水平检测发现H37Ra免疫组显著高于NS对照组(P＜0.05)；H37Ra免疫组略高于BCG免疫组。5.毒株攻击4w后，H37Ra组小鼠肺、脾、肝组织荷菌量与NS对照组比较分别下降0.954、1.228和0.8831og10CFU，差异有显著性(P＜0.05)。H37Ra组各脏器组织荷菌量与BCG组之间差异均无显著性(P＞0.05)。6.组织病理分析发现：H37Ra组小鼠肺泡腔有少量浆液性渗出，肺泡间隔增厚，局部有巨噬细胞浸润和肉芽肿形成。BCG组小鼠肺泡结构完整，巨噬细胞的浸润略增加，肺泡壁略增厚。而NS对照组病变严重而广泛，肺泡腔内有明显的出血性渗出液，大部分肺泡壁肿胀、增厚，肺泡结构被破坏。 结论：1.H37Ra在体内生长速度明显慢于H37Rv，稍快于BCG，初步表明H37Ra的毒力明显低于H37Rv，较BCG稍强，但对小鼠比较安全。2.H37Ra能有效激活巨噬细胞。3.H37Ra免疫小鼠后能产生较强的抗结核细胞免疫，能抵抗毒株H37Rv的攻击，免疫保护效果与BCG相近。

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摘要

前言

第一部分 结核分枝杆菌H37Ra体内生长特性及对巨噬细胞的活化能力

1材料

2方法

3结 果

4讨 论

第二部分结核菌H37Ra在小鼠体内诱导的抗结核细胞免疫应答及免疫保护效果的研究

1材料

2方法

3结 果

4讨 论

全文小结

参考文献

文献综述

致 谢

攻读硕士期间文章发表情况