体外诱导小鼠骨髓细胞向未成熟树突状细胞分化的实验研究

摘要

目的:以小鼠骨髓细胞为前体,建立一种高效、简便的体外扩增、分离培养未成熟树突状细胞(imDC)的方法,从而为imDC的实验研究和临床应用奠定基础。
　　 方法:实验分为GM/IL-5、GM/IL-7和GM/IL-LPS三组:制备C57BL/6小鼠骨髓细胞,三羟甲基氨基甲烷-氯化铵缓冲液(Tris-NH4Cl)裂解红细胞后,以重组小鼠粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)对其联合诱导培养,48 h后通过贴壁法去除悬浮的粒细胞及淋巴细胞,之后隔天半量换液一次,最后根据DC培养72 h后自动从塑料板分离的特性分别于第五天(GM/IL-5组)、第七天(GM/IL-7组)收集悬浮及疏松贴壁细胞,而GM/IL-LPS组则是于第六天半量换液后添加大剂量脂多糖(LPS)继续培养18 h后收集所得；将收获的三组细胞进行形态及功能学的鉴定,即:扫描电镜观察细胞形态、流式细胞术(FCM)测定细胞表面分子的表达、同种异体混合淋巴细胞反应(MLR)检测三组DC刺激同种异体T细胞增殖的能力。
　　 结果:扫描电镜下所收集的三组细胞均具有典型DC形态；流式结果表明细胞表面均高表达小鼠髓源性DC相对特异性标志CD11c,表达率达73％以上,GM/IL-5组DC细胞表面CD40、CD86、MHC-Ⅱ的表达率分别为34.46％、34.21％、45.16％,GM/IL-7组则分别为46.99％、68.79％、94.37％,GM/IL-LPS组为78.68％、89.84％、96.75％;MLR中GM/IL-5组DC刺激同种异体T细胞活化增殖的能力不如GM/IL-7、GM/IL-LPS组强(P<0.05)。
　　 结论:此种方法能于体外定向诱导和扩增出大量具有典型DC形态、细胞表型及较高纯度的髓源性imDC,不仅具有降低实验成本、缩短培养时间等优点,而且能有效界定未成熟与成熟DC间的分化时限,这将为后续研究imDC在器官移植后诱导机体免疫耐受的临床应用奠定基础。