损伤肝脏条件培养液体外诱导小鼠骨髓细胞分化为肝细胞的研究

摘要

目的：探讨小鼠骨髓单个核细胞(bonemarrowmononuclearcells，BMMNCs)在体外诱导分化为肝细胞的可行性及其方法。 方法：将CCl4肝损伤小鼠的肝脏进行培养，收集上清，添加到培养液中诱导BMMNCs分化。倒置显微镜连续观察细胞分化过程的形态学变化。培养1,7，14，21天时，逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组细胞甲胎蛋白(AFP)、细胞角蛋白18(CK18)、细胞角蛋白19(CK19)、肝细胞核因子3β(HNF3β)、酪胺酸胺基转移酶(rAT)和白蛋白(ALB)基因的表达，免疫荧光反应检测AFP、CK18、CK19、ALB蛋白水平的表达；高碘酸—希夫反应(PAS反应)检测细胞糖原合成。 结果：诱导组细胞出现肝细胞样形态变化；培养第7天出现AFP、CK19基因表达，其中AFP第14天表达增强，第21天表达减弱；第14天开始出现ALB、CK18、HNF3β基因表达，而后持续表达到21天；第21天出现TAT表达。免疫荧光反应表明，诱导21天后细胞ALB、CK18、CK19、AFP蛋白表达为阳性；诱导21天的细胞PAS糖原合成反应呈阳性。 结论：BMMNCs在损伤肝脏条件培养液诱导下可跨越分化为肝细胞，该体系的建立在国内外尚属首次，它有助于骨髓细胞向肝细胞分化机制的深入研究，同时为临床上肝细胞移植治疗提供新的种子细胞来源途径。