喘息性疾病患儿人类博卡病毒感染临床特征分析

摘要

目的：
　　 探讨重庆地区下呼吸道感染患儿中人博卡病毒（HBoV）的流行情况、喘息性疾病患儿感染HBoV的临床特点、呼吸道HBoV病毒载量与患儿临床表现之间的关系，以期明确HBoV在下呼吸道感染中是扮演的是病原（pathogen）还是“过客（passenger）”的角色。
　　 方法：
　　 1.从2006年4月～2010年1月，共收集136例喘息性疾病住院患儿的下呼吸道分泌物。同时，收集了50例同期住院、临床无喘息表现患儿的下呼吸道分泌物作为对照。所有标本经纤维支气管镜检查吸取。
　　 2.利用免疫荧光快速诊断试剂盒筛查标本7种常见呼吸道病毒。
　　 3.DNA病毒检测：用PCR技术检测标本中DNA病毒。标本收集后，取200μl用QIAamp（）DNA Mini Kit（QIAGEN Inc，USA）提取病毒基因组DNA，提取的DNA用于病毒基因核酸片断的扩增。
　　 4.RNA病毒检测：用RT-PCR技术检测标本中RNA病毒。标本收集后，取200μl上清用QIAamp（）RNA Mini Kit（QIAGEN Inc，USA）提取病毒基因组RNA，提取的RNA经过反转录后用于病毒基因核酸片断的扩增。
　　 5.Realtime-PCR定量检测HBoV：使用TaqMan探针法对HBoV阳性标本中提取的DNA进行HBoV定量检测，结果以copies/ml下呼吸道分泌物表示。
　　 6.统计分析：计数资料的比较使用x2检验，计量资料如病毒载量、住院时间、临床症状评分之间的比较使用两组计量资料的秩和检验、两独立样本的t检验，组间比较以P<0.05为有统计学意义的标准，使用SPSS17.0进行统计结果分析。
　　 结果：
　　 1.一般情况：
　　 2006年4月至2010年1月，共收集标本186份。其中对照组（C组）患儿50例，男性28例，年龄分布为3月～169月，年龄中位数为16月。喘息组（W组）患儿136例，男性89例，年龄分布为1月～141月，年龄中位数为10月。
　　 2.下呼吸道病毒检出情况：
　　 186例中61例患儿下呼吸道分泌物标本经过呼吸道病原免疫荧光、PCR检测，没有发现常见呼吸道病毒。186例患儿下呼吸道分泌物标本均未检出PIV-2。
　　 本组资料所有病毒中，检出率最高的是PIV-3，其次是RSV、HBoV、RV。单一病毒感染的检出率，仍是这四种病毒居前四位。
　　 31例HBoV阳性标本中，单纯HBoV阳性14例，其余17例为混合感染，HBoV混合感染率高达55％，与HBoV混合感染的常见病毒依次为RSV、RV、PIV-3、ADV。
　　 冬季HBoV检出率最高，以12月份最为突出，除9月份外，全年各月份均有HBoV感染病例。HBoV感染的患儿年龄分布为4～169月，平均年龄16.41±5.61月（X±SEM）。HBoV感染以6～24月大小的患儿为主。
　　 3.HBoV定量检测结果：
　　 Realtime-PCR定量检测HBoV结果，根据参考文献[1]：40个循环之前有扩增反应、病毒载量大于500copies/ml分泌物的标本视为特异性、有效扩增，HBoV定量>1E4 copies/ml分泌物定义为高病毒载量。对31例患儿的下呼吸道分泌物标本进行HBoV定量检测，标本HBoV定量介于5.02E2～5.26E9 copies/ml分泌物之间。
　　 对HBoV定量>500copies/ml分泌物的标本进行分析，其中高载量标本10例，占32％，低载量标本21例，占68％。对照组、喘息组HBoV载量平均值分别为4.35E3±1.72E3copies/ml分泌物、2.58E7±1.89E7copies/ml分泌物，中位数分别为2290.47copies/ml分泌物、13342.83copies/ml分泌物，喘息组标本HBoV载量显著高于对照组（P=0.01）。
　　 4.喘息性疾病患儿HBoV感染的临床特点：
　　 高载量组与低载量的呼吸道症状评分无显著差异（t检验，P>0.05）。
　　 高载量组平均住院时间明显长于低载量组，二者相比有统计学差异（t检验，P<0.05）。
　　 高载量组中喘息时间超过4周的病例数显著多于低载量组（x2检验，P<0.05）。
　　 结论：
　　 1.重庆地区下呼吸道感染的儿童HBoV感染阳性率为17％，HBoV与其它呼吸道常见病毒的混合感染率是55％，与HBoV混合感染的病毒依次是RSV、RV、PIV-3、ADV。
　　 2.HBoV感染主要发生在6个月～2岁的儿童，HBoV的流行季节是冬季。
　　 3.喘息组标本HBoV载量显著高于对照组（P=0.01）；在喘息性疾病患儿中，高载量组平均住院时间明显长于低载量组（P<0.05），高载量组中，喘息时间超过4周的病例数显著多于低载量组。提示喘息是HBoV感染的重要临床表现，当HBoV以较高的病毒载量存在于呼吸道时，扮演病原（pathogen）的角色。